MHC Ⅰ类分子在小鼠神经系统中功能的初步研究

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长期以来认为正常的没有受到感染的神经元是不表达MHCⅠ类分子的。但近年研究发现神经元能正常的表达MHCⅠ类分子,但其具体功能还不是很清楚。 在小鼠原代神经元水平用免疫荧光的手段证实了MHCⅠ类分子H2-K、H2-Qa1在小鼠原代神经元的表达。另外还构建了pBluescripte(Fzd9)-H2-K(flag)/H2-D(myc)/β2m的重组质粒,并制作了在小鼠海马区过表达H2-K全长和β2m的双转基因小鼠,得到三只双转H2-K全长和β2m的转基因小鼠以及四只单转β2m的单转基因小鼠。 为研究MHCⅠ类分子在神经系统中的功能及其发挥功能的具体机制,从C57BL/6j小鼠中提取RNA并做逆转录PCR而后利用特异性引物扩PCR,获得感兴趣的MHCⅠ类分子的基因:H2-T22、H2-T23,H2-Q7。并构建了H2-T22,H2-T23,H2-Q7全长及H2-T22,H2-T23胞内段的原核表达质粒pGEX-4T-1-H2-T22fl/H2一T23fl/H2-Q7fl/H2-T22 CTF/H2-T23CTF。 利用阴离子交换层析和GST亲和层析两步法纯化得到了H2-T22和H2-Qa1(H2-T23)的胞内段蛋白,以纯化好的胞内段蛋白为诱饵利用GST-PULL-DOWN的方法在小鼠的脑匀浆液中寻找与其相互作用的蛋白,以便更好的了解MHCⅠ类分子是通过什么方式发挥功能以及是如何发挥的,现已得到有待进一步鉴定的几个条带。 这些都为后续实验的开展奠定了良好的基础。
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