【摘 要】
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黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）引起的黄瓜花叶病毒病、辣椒花叶病毒病和烟草花叶病毒病等病害对经济作物造成了巨大的经济损失。目前,没有有效的抗CMV药剂防治该病毒引起的病害,寻找CMV致病的分子靶标是创制抗CMV药剂的关键所在。因此开展CMV潜在分子靶标的发掘对于抗CMV药剂的研发和创新具有重要意义。本论文以CMV 2b蛋白作为潜在的分子靶标,通过原核表达获得CMV
【基金项目】
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国家自然科学基金,课题名称:高效抗黄瓜花叶病毒 1,4-戊二烯-3-酮化合物 N12 的作用机制研究,课题编号:31960546；
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黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）引起的黄瓜花叶病毒病、辣椒花叶病毒病和烟草花叶病毒病等病害对经济作物造成了巨大的经济损失。目前,没有有效的抗CMV药剂防治该病毒引起的病害,寻找CMV致病的分子靶标是创制抗CMV药剂的关键所在。因此开展CMV潜在分子靶标的发掘对于抗CMV药剂的研发和创新具有重要意义。本论文以CMV 2b蛋白作为潜在的分子靶标,通过原核表达获得CMV 2b蛋白。一方面运用微量热泳动法（Microscale thermophoresis,MST）和等温滴定量热法（Isothermal titration calorimetry,ITC）对CMV 2b蛋白与抗病毒小分子化合物进行离体相互作用研究,筛选高活性抗病毒小分子化合物。另一方面采用农杆菌介导法、实时荧光定量PCR（Real-time quantitative polymerase chain reaction,q PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blotting,WB）在体内验证其活性,通过定点突变初步验证CMV 2b蛋白与高活性抗病毒小分子化合物的关键结合位点。实验结果表明:成功获得CMV 2b融合表达蛋白,通过MST结合ITC技术筛选出与CMV 2b蛋白结合较好的化合物LP11。在转录和翻译水平上分别通过q PCR和WB验证了LP11能够有效的抑制CMV感染烟草,并通过突变CMV 2b蛋白得出N端的第15位亮氨酸和第18位甲硫氨酸是与化合物LP11结合的关键位点,这为筛选和创制抗CMV药剂的提供了一定的研究基础。
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