迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）是一种重要的革兰氏阴性病原菌，感染宿主范围广泛，包括鱼类、两栖类、爬行类及哺乳类，给水产养殖业造成了巨大的经济损失，而且E.tarda是爱德华氏菌属中唯一可以感染人的种类。Ⅲ型分泌系统(T3 SS)是E.tarda重要的致病因子，对于细菌在宿主细胞中的繁殖和其致病性至关重要。虽然T3SS基因簇的结构及部分基因的功能得到了初步研究，但其分子致病机理还未被充分阐明。本研究围绕迟缓爱德华氏菌T3SS基因簇上功能未知基因esaE(Orf13)开展研究工作，着重阐述EsaE对T3SS蛋白分泌及毒力的影响，研究的开展有助于阐明T3SS如何介导E.tarda致病力，并将为以T3SS为靶向的疫苗制备提供理论依据。　　主要研究结果如下:　　第一，EsaE参与迟缓爱德华氏菌的致病过程。　　本研究采取基因缺失突变技术，构建了esaE基因缺失突变株。人工感染实验表明，该突变株对蓝曼龙鱼的半数致死剂量(LD50)是野生型菌株的约4倍。细菌在鱼体内存活实验表明，感染后7天，该突变株在蓝曼龙鱼体内存活率为69％，而野生型只有6％。细胞毒性检测发现，esaE基因突变后，对细胞的毒性极显著减弱。此外，还发现esaE突变株在巨噬细胞中的繁殖能力明显低于野生型，呼吸爆发指数增强。可见，esaE基因缺失突变后迟缓爱德华氏菌的毒力明显降低，故可用于下一步的减毒疫苗筛选和鉴定工作。　　第二，EsaE调控T3SS输送器蛋白和效应分子蛋白的分泌。　　EsaE依赖T3SS分泌，并且可以转运至宿主细胞的胞质中。esaE基因缺失后，迟缓爱德华氏菌失去自聚集能力，T3SS的输送器蛋白EseBCD和效应分子EseJ均不能分泌至胞外，效应分子EseG既不能分泌到胞外也不能被转运进宿主细胞，但这5个蛋白的胞内表达量与野生型一致。在ΔesaE突变株中过表达缺失N端2nd-15th氨基酸残基的EsaE，发现EsaEΔ2-15aa不能分泌，且T3SS的输送器蛋白和效应分子均不能分泌，但在野生型中过表达EsaEΔ2-15aa，EsaEΔ2-15aa可被分泌至胞外，可见N-端的14个氨基酸残基对EsaE的分泌不是必须的，且全长EsaE的存在是T3SS正常分泌输送器蛋白和效应分子蛋白所必须的。在ΔesaE中表达非分泌型的EsaE可以使突变株胞外蛋白的分泌恢复至野生型水平。EsaE的胞内表达量与效应分子的分泌和转运至宿主细胞呈正相关。此外，输送器蛋白编码基因eseBCD的缺失亦会影响EsaE的分泌，pull-down实验也表明EsaE与EseB有相互作用。　　第三，EsaE与T3SS蛋白EsaK和EsaH有相互作用。　　酵母双杂交和pull-down实验均证明EsaE与T3SS蛋白EsaK和EsaH有相互作用，且缺失EsaEN端2nd-15th氨基酸残基不影响他们之间的相互作用，EsaE影响了EsaK和EsaH的转录，esaK或esaH缺失突变后EsaE不能分泌。生物信息学分析发现EsaE与沙门氏菌SsaE，假单胞菌PscE和耶尔森氏菌YscE属于同一家族，在突变株ΔesaE中分别表达这三个蛋白均不能恢复ΔesaE的T3SS蛋白分泌。　　综上所述，EsaE分泌并且能转运进宿主细胞，从细菌胞内控制T3SS效应分子的分泌和转运，且从细菌胞内控制T3SS输送器蛋白的分泌，因此在E.tarda的致病过程中发挥关键作用。