用小鼠ES细胞和兔ES细胞制作嵌合体的研究

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本实验主要用囊胚注射的方法来制备嵌合体小鼠和兔,用于检验所培养的小鼠和兔ES细胞的全能性。为动物胚胎工程的研究建立平台,进而为制作转基因动物、动物疾病模型、动物生物反应器提供技术支持。本论文分两个部分,第一部分为用小鼠的ES细胞构建小鼠嵌合体;第二部分为用兔的ES细胞制作兔嵌合体。 在用小鼠的ES细胞构建小鼠的嵌合体中,根据ES细胞来源的小鼠毛色为灰色,选择使用了白色的昆明(KM)雌鼠的胚胎为宿主胚胎。实验比较了秋冬季如8、9、10、¨月份的胚胎收集情况,发现到¨月份的便收集不到囊胚,说明白¨月份开始的秋季末期至冬季不适合取小鼠的胚胎。对收集的小鼠囊胚共有201枚注射了小鼠ES细胞。所用小鼠ES细胞的传代至第38-49代。重组胚胎被移植到12只代孕小鼠体内,最后共产出13只仔鼠,其中有5只毛色嵌合的嵌合体出生,来源于传至第4l代的ES细胞。将性成熟的嵌合体小鼠与正常小鼠合笼,共产出22窝仔鼠,但子代中没有毛色杂合小鼠。这些结果说明原先制备的小鼠ES细胞具有分化潜能,可以用来制备嵌合体小鼠,只是由于偶然原因,在重组胚发育中来源于ES细胞未能进入嵌合体小鼠的生殖系。 在构建兔的嵌合体中,从1月至12月的囊胚收集中4月份的每只兔子平均获得囊胚数最少,仅9枚。而其它月份的平均囊胚数都处于13.18枚之间,其中6月份最多平均有29枚囊胚。在胚胎移植上,n、7、4月份的移植效果比较差,而6、1、10月份效果相对比较好,胚胎移植后妊娠率比较高(分别达到100%、75%、66.67%)。对受体母兔,选用自然发情的母兔直接进行激素处理,经胚胎移植后能怀孕并生出85只仔兔。同时,采取与宿主胚胎同期处理的代孕兔和比宿主胚胎晚一天处理待孕兔两种处理方式,经t检验发现,两种处理方式经胚胎移植后,其怀孕率、仔兔出生率差异并不显著(t=1.91
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