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目的:SapC-DOPS复合物是由一种多肽物质(Saposin C)和内小叶成份(即DOPS，二油基磷脂酰丝氨酸)组成的蛋白脂质微粒体。前期研究已证明SapC-DOPS复合物具有广谱抗肿瘤的活性。但是，对于免疫细胞是否参与这种复合物的抗肿瘤作用，目前尚未报道。因此，本研究探讨了SapC-DOPS复合物对小鼠固有免疫系统中重要免疫细胞的作用，为进一步理解该复合物抗肿瘤的机制提供理论依据。
方法:通过体内和体外实验方法研究SapC-DOPS对小鼠固有免疫系统的作用。在体内实验中，通过腹腔注射的方法隔天注射20mg/kg/只剂量的SapC-DOPS或1×PBS到C57BL/6小鼠体内，分别在第7、14、21和28天获得血清、腹水及脾脏，并对相关指标进行检测。①ELISA方法检测小鼠血清中TNF-α和IFN-γ的水平；②流式细胞仪检测腹腔巨噬细胞表面标志分子MHC-Ⅱ的表达水平；③RT-PCR检测腹腔巨噬细胞IL-1β、TNF-α和IFN-β的mRNA水平；④流式细胞仪检测小鼠脾脏DC细胞数量及表面的MHC-Ⅱ和CD40表达水平。在体外实验中，以小鼠巨噬细胞系Raw264.7作为实验对象，用不同浓度SapC-DOPS(0.2μg/ml，1μg/ml，5μg/ml)处理细胞，然后进行相关指标的检测。①Annexin V/PI双染法检测24h后细胞早期凋亡；②RT-PCR检测SapC-DOPS作用3h、6h、12h及24h后细胞表达TNF-α、IL-1β和IFN-β的水平；③ELISA的方法检测了SapC-DOPS处理24h后细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β的水平。为了进一步探讨SapC-DOPS对巨噬细胞的作用机制，用5μg/ml的SapC-DOPS处理细胞，RT-PCR检测SapC-DOPS作用3h、6h、12h及24h后TLR4和TLR2表达水平；流式细胞仪检测SapC-DOPS作用24h后细胞表面TLR4表达水平。Westernblot方法检测5μg/ml的SapC-DOPS作用0.5h、1.5h及3h后NF-κB的核转位情况，并在NF-κB的抑制剂PDTC预处理细胞1h后，用Realtime-PCR的方法检测SapC-DOPS引起的巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β及IFN-β的水平。
结果:①SapC-DOPS可诱导小鼠血清TNF-α和IFN-γ水平升高，但这两种细胞因子开始升高的时间点不同，其中TNF-α从第7天开始升高，IFN-γ则在第14天才开始升高，这种升高一直持续到第28天。②SapC-DOPS作用7天后，与PBS组相比，腹腔巨噬细胞表达MHC-Ⅱ的水平明显降低；SapC-DOPS作用后，，腹腔巨噬细胞表达TNF-α、IL-1β和IFN-β的mRNA水平较PBS组有明显升高。③SapC-DOPS作用7天后DC细胞的数量比PBS组均有显著升高，第14天以后恢复到正常水平，并一直持续到第28天。DC表面MHC-Ⅱ及共刺激分子CD40均没有变化。④体外实验结果表明：不同浓度SapC-DOPS(0.2μg/ml，1μg/ml和5μ g/ml)作用24h后均不会引起小鼠Raw264.7细胞的早期凋亡，但能明显提高这种细胞TNF-α、IL-1β及IFN-β的表达水平，且具一定的剂量依赖性。对其作用机制的研究表明：5μg/ml的SapC-DOPS可引起Raw264.7细胞表达TLR2的mRNA水平升高，而不影响TLR4的表达：5μg/ml的SapC-DOPS能引起Raw264.7细胞内NF-κB核转位发生改变，PDTC可部分抑制由SapC-DOPS引起的巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β升高，却增强IFN-β的表达。
结论:SapC-DOPS可激活小鼠腹腔内巨噬细胞，使其高表达TNF-α、IL-1β和IFN-β，但降低MHC-Ⅱ的表达。SapC-DOPS对巨噬细胞的这种激活作用可能是由TLR2和TLR4信号通路共同介导的，而且NF-κB也参与SapC-DOPS对巨噬细胞的作用。但SapC-DOPS不影响DC细胞增殖和抗原提呈能力。这些结果提示，SapC-DOPS可以激活巨噬细胞，影响巨噬细胞载肿瘤发生发展中的作用。