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研究背景与目的：以血管发育为治疗靶点,包括抑制血管和促血管治疗等已经成为诸如癌症、心血管疾病等常见疾病的新兴治疗手段。然而,我们对于血管发育的过程以及其分子调节机制了解还不完全。动脉和静脉血管是血管系统发育过程中最早形成的重要部分,它们对于胚胎和成体都具有重要的作用,但它们之间在结构和功能上却又不尽相同。血管内皮生长因子VEGF家族被认为是最为重要的分泌型促血管生成因子,在胚胎血管系统发育和肿瘤血管生成过程中均发挥重要作用。在血管发育过程中VEGF、Notch信号通路关系密切,虽然可各自独立发挥不同作用,但二者之间也存在相互作用。中医药治疗肿瘤已有上千年的历史,积累了丰富的临床资料,软坚散结是治疗肿瘤主要大法,对于这类药物在抗血管新生方面作用值得进一步研究。本实验以TG品系的flila-EGFP转基因斑马鱼为模型,利用其绿色荧光蛋白显影特质,在显微镜下观察鳖甲水提物及青皮水提物对斑马鱼体内血管生成的抑制效果,并且,借此进一步研究具有抗新生血管作用的鳖甲、青皮对VEGF、Notch/D114通路的调控作用。研究方法1、选用TG品系的flila-EGFP转基因斑马鱼为生物模型。将新鲜配置好的鳖甲、青皮提取物处理受精后的斑马鱼胚胎,药物处理实验结束后,将各组胚胎在体式荧光显微镜下进行血管表型观察和拍照,以分析各个样品对斑马鱼体节间血管(ISVs)生成的影响。2、利用实时荧光定量PCR技术检测斑马鱼胚胎受到鳖甲、青皮水提物处理后,Notch信号通路中D114/Notchla/HEY2/EFNB2a以及VEGF信号通路中VEGFaa/VEGFR1/VEGFR2的表达情况,研究这两个信号通路在斑马鱼胚胎发育过程中的生理学作用。结果：1、与阴性对照组相比,鳖甲水提物组、青皮水提物组干预的实验组斑马鱼胚胎ISVs及DLAV的荧光表达均具有差异,提示中药水提物组具有抑制斑马鱼新生血管生成的作用。2、鳖甲、青皮两种水提物均能够显著上调斑马鱼胚胎D114、Notch1a、HEY2表达水平(P<0.05)。青皮水提物能够非常显著上调斑马鱼胚胎EFNB2a表达水平(P<0.01)。可以推测两种中药水提物抑制斑马鱼胚胎新生血管生成与Notch-D114通路上调活化有关。3、鳖甲、青皮两种水提物能够显著上调斑马鱼胚胎VEGFaa,其中青皮水提物组尤为显著(p<0.01)；,鳖甲、青皮两种中药水提物能够显著上调斑马鱼胚胎VEGFR1,(p<0.01)；鳖甲、青皮两种中药水提物能够显著上调斑马鱼胚胎VEGFR2表达水平,其中青皮水提物组尤为显著(p<0.01)可以推测两种中药水提物能够活化VEGF通路。4、瓦他拉尼组较空白对照组VEGFaa基因表达水平明显上升,(p<0.05)；瓦他拉尼能明显抑制斑马鱼胚胎VEGFR1/VEGFR2的mRNA表达水平,(p<0.01)。结论：1、鳖甲、青皮水提物在转基因斑马鱼生物模型上具有抑制新生血管的作用；2、鳖甲及青皮水提物抑制斑马鱼胚胎新生血管生成与上调D114/Notch1a/HEY2/EFNB2a的基因表达,从而活化Notch-D114通路有关；3、鳖甲、青皮水提物可以活化VEGF信号通路,鳖甲、青皮水提物抑制血管生成与VEGF通路和Notch-D114通路之间复杂的反馈调节有关。