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第一章 大鼠心跳骤停复苏模型的建立与观察目的:建立模拟临床上DCD供者器官捐献前出现过心跳骤停并成功心肺复苏后的血流动力学改变的大鼠心跳骤停模型。方法:通过夹闭大鼠腹主动脉5min后再开放的方式,模拟临床DCD供者器官捐献前出现过心跳骤停且成功心肺复苏后的血流动力学改变。实验组夹闭腹主动脉后胸腔以下循环即停止,再开放后血流恢复造成缺血性再灌注损伤。同时设立假手术组(仅开腹、游离腹主动脉,不夹闭腹主动脉),观察夹闭后大鼠平均动脉压(MAP)、二氧化碳分压(PaC02)、氧分压(Pa02)的改变。结果:实验组在夹闭腹主动脉后大鼠的MAP即刻降为零,明显低于假手术组(P<0.05),且低于10mmHg。5min开放腹主动脉后实验组MAP恢复正常,与假手术组无差异(P>0.05)且高于60mmHg。Pa02在夹闭腹主动脉后相对假手术组逐渐降低,在开放腹主动脉后10min恢复正常,与假手术组无差异(P>0.05)。PaC02在夹闭后腹主动脉后相对于假手术组逐渐升高,在开放腹主动脉后10min恢复正常,与假手术组无差异(P>0.05)。在开放腹主动脉后,实验组的MAP与假手术组无统计学差异(P>0.05)。结论:1、建立的大鼠心跳骤停复苏模型操作简单、稳定可靠、重复性强。2、建立的大鼠心跳骤停复苏模型能良好地模拟临床上供者在器官捐献前出现过心跳骤成功心肺复苏后的血流动力学改变。第二章 大鼠心跳骤停复苏后DCD供肝肝移植模型的建立目的建立模拟临床上DCD供者器官捐献前曾出现过心跳骤停并成功心肺复苏后供肝原位肝移植的大鼠模型。方法在Kammada二袖套法的基础上进行改良,通过在供肝获取前夹闭供体腹主动脉5min后再开放的方法来模拟供体移植前心跳骤停心肺复苏成功后的血流动力学变化,关腹2h后行大鼠原位肝移植,建立大鼠心跳骤停复苏后供肝肝移植模型。同时建立无夹闭的对照组(不夹闭腹主动脉,仅行原位肝移植),并检测术前及术后6h、1d、3d、7d肝功能指标(血清ALT水平)。结果共完成了 30例大鼠心脏骤停复苏后DCD供肝肝移植手术,手术成功率93%(28/30)。供、受体手术时间分别为(49±4)min和(54±5)min,无肝期(17±2)min。实验组与对照组术后ALT在均开始升高,6h达到峰值,7d基本降至正常水平,且实验组ALT水平高于对照组,两者差别有统计学意义(P<0.05)。结论二袖套法基础上建立的大鼠心跳骤停复苏后供肝肝移植模型稳定、可靠、重复性强。本模型模拟了临床上供体捐献前曾出现过心跳骤停且成功复苏后供肝获取行肝移植的血流动力学变化,为此类供体肝移植的研究提供了一种新的实验方法。第三章 大鼠供体心跳骤停复苏后不同时间取肝对DCD肝移植胆管缺血性再灌注损伤的影响目的探索大鼠供体心跳骤停复苏后不同时间取肝对DCD肝移植胆管缺血性再灌注损伤的影响方法根据实验二建立的大鼠心跳骤停复苏后DCD供肝肝移植模型,根据供体大鼠心跳骤停复苏后不同时间点获取供肝,即夹闭腹主动脉5min后不同时间点取肝,将大鼠分组为:LR2h组:腹主动脉开放2小时时取肝;LR4h组:腹主动脉开放4小时时取肝;LR6h组:夹闭腹主动脉开放6小时时取肝;LR8h组:腹主动脉开放8小时时取肝;LR10h组:腹主动脉开放10小时时取肝。同时设立假手术组(Sham组):仅行麻醉、开腹、游离腹主动脉、肝脏后关腹,不夹闭腹主动脉,不行原位肝移植。无夹闭的对照组(Cont组):不夹闭腹主动脉,仅行原位肝移植。各组移植后6h、1d、3d、7d检测血清ALT、GGT和ITBL水平,取肝门部胆管组织测定SOD活性水平。肝门部胆管组织HE染色病理学检查。TUNEL法检测肝门部胆管上皮细胞凋亡情况。结果对照组及实验组血清ALT、GGT和ITBL水平在术后均有所升高,实验组ALT在术后6小时达到高峰,之后成下降趋势,3天降至正常水平,而GGT和ITBL在术后6小时后仍继续升高,3天达到高峰,7天以后才恢复正常。实验组中LR 6h组术后血清ALT、GGT和ITBL水平同一时间点明显高于其他各组,差别有统计学意义(P<0.05)。实验组与对照组移植术后SOD活力均先降低后升高,术后1天降到最低值,之后开始升高,术后7天恢复正常水平。实验组中LR6h组术后SOD活力在同一时间点明显高于其他各组,组间比较差异显著(P<0.05)。在实验组中HE染色石蜡切片观察,实验组中LR6h组病理改变最严重,与TUNEL法显示结果相似,实验组中LR6h组凋亡指数最高,差别有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠供体心跳骤停复苏后6小时取肝行原位肝移植,术后胆管的缺血再灌注性损伤最为严重,因此不宜在此时间点进行供肝获取。