美花圆叶筋骨草的化学成分与质量研究

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美花圆叶筋骨草为唇形科筋骨草属植物美花圆叶筋骨草Ajuga ovalifolia Bur.et Franch.var.calantha(Diels)C.Y.Wu et C.Chen的全草,为藏药达巴巴来源之一。可用于治浮肿后流黄水、关节积黄水、骨松质发炎、跌打损伤、骨折挫伤、筋骨疼痛和风湿关节痛,还可用于止血。本论文对美花圆叶筋骨草进行了最大耐受试验及镇痛、止血有效部位的筛选;对美花圆叶筋骨草的化学成分进行了提取分离;对美花圆叶筋骨草中的挥发油进行了GC-MS分析;对美花圆叶筋骨草中的三个黄酮类成分进行了含量测定;用高效液相色谱法(HPLC法)对美花圆叶筋骨草的指纹图谱进行了研究。主要研究结果包括如下几个方面:1、通过美花圆叶筋骨草急性毒性试验和最大耐受量试验可知:美花圆叶筋骨草水提物和美花圆叶筋骨草醇提物最大给药量均为30g生药/kg体重,约为临床患者用量的200倍,美花圆叶筋骨草水提物和美花圆叶筋骨草醇提物无明显毒理反应,是安全可靠的。通过美花圆叶筋骨草镇痛止血的药理学筛选可知:美花圆叶筋骨草水提物和美花圆叶筋骨草醇提物具有不同程度的镇痛止血功能。2、通过提取分离,从美花圆叶筋骨草的石油醚部位和乙酸乙酯部位得到8个单体(Ⅰ~Ⅷ),鉴定出其中7个化合物(Ⅱ~Ⅷ)的结构。其中,化合物Ⅱ鉴定为乌苏酸(usolic acid):化合物Ⅲ鉴定为β-谷甾醇(β-sistosterol):化合物Ⅳ鉴定为芫花素(genkwanin);化合物Ⅴ鉴定为木犀草素(luteolin):化合物Ⅵ鉴定为芹菜素(apigenin)化合物Ⅶ鉴定为胡萝卜苷(daucosterol);化合物Ⅷ鉴定为Brevi florasterone.7个化合物均为首次从美花圆叶筋骨草中得到。3、对美花圆叶筋骨草的挥发油进行了GC-MS分析。在美花圆叶筋骨草挥发油的GC图中,出现34个峰,经MS分析后指认了其中29个,含量占挥发油总量的98.12%。其中脂肪族烯醇类成分6个,占总量的39.63%,脂肪酸类成分5个,占总量的49.42%,萜类成分两个。挥发油中的主要成分为[Z,Z,Z]-9,12,15-十八碳三烯-1-醇,含量为34.39%;正十六酸(棕榈酸),占42.79%。4、通过方法学考察建立了HPLC法同时测定美花圆叶筋骨草中芫花素和芹菜素含量的方法。固定相:C18色谱柱;流动相:甲醇-0.1%冰醋酸水溶液(80:20),流速:1.0ml/min;检测波长为269nm。芫花素的标准曲线方程为:A=3093979x-45295(r=0.9999)。进样量在0.1248μg~1.248μg范围内,芫花素峰面积值与进样量有良好的线性关系;精密度试验、重复性试验、回收率试验的RSD均小于2.0%,符合规定。芹菜素的标准曲线方程为:A=3031649X+146083(r=0.9997)。进样量在0.1296μg~1.296μg范围内,芹菜素峰面积值与进样量有良好的线性关系。精密度试验、重复性试验、回收率试验的RSD均小于2.0%,符合规定。通过方法学考察建立了HPLC法测定美花圆叶筋骨草中木犀草素含量的方法。固定相:C18色谱柱;流动相:甲醇-0.1%冰醋酸水溶液(70:30),流速:1.0ml/min;检测波长为350nm。木犀草素的标准曲线方程为:A=3318415x-70716(r=0.9996)。进样量在0.1264μg~1.2640μg范围内,木犀草素峰面积值与进样量有良好的线性关系。精密度试验、重复性试验、回收率试验的RSD均小于2.0%,符合规定。用建立的方法测定了三批样品,按干燥品计,芫花素含量为0.058%~0.073%;芹菜素含量为0.069%~0.085%;木犀草素含量为0.092%~0.123%。5、以木犀草素为参照物,建立了HPLC法测定美花圆叶筋骨草的指纹图谱的方法:以C18柱为固定相;流动相为:乙腈-0.1%冰乙酸水溶液梯度洗脱,梯度为:15:85~35:65(0min-30min);35:65~80:20(30min~45min);80:20~100:0(45min~50min)。样品进样量为10μl,检测波长325nm,色谱图记录时间为65分钟。通过方法学考察,本方法的精密度、重复性均符合要求。通过测定10批样品,建立了美花圆叶筋骨草的对照指纹图谱,10批样品的13个共有峰峰面积之和大于90%。说明本指纹图谱具有代表性,能对美花圆叶筋骨草整体质量水平的控制提供依据。
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