研究目的慢性内脏痛是临床常见病症,其发病机制不清,也缺乏有效的治疗手段。近年来有文献报道大脑岛叶皮层(IC)参与了慢性内脏痛的产生,但详细的分子机制还不清楚。由于外周嘌呤能受体参与慢性痛发生发展,因此,本研究的第一部分着重研究IC脑区嘌呤能受体在慢性内脏痛中作用及其机制。经颅直流电刺激(tDCS)缓解慢性疼痛具有无痛苦、方便快捷等特点,已成为一种备受欢迎的治疗手段,但其镇痛作用机制却鲜有报道。因此,本研究的第二部分着重探讨了tDCS是否通过抑制嘌呤能受体敏化来缓解慢性内脏痛,从而为临床治疗提供理论依据。实验方法1.利用新生期母爱剥夺(NMD)方法建立慢性内脏痛的大鼠模型。2.通过检测结直肠扩张(CRD)的阈值来评判成年大鼠内脏痛敏感的行为学变化。3.通过连接有刺激隔离器的直流电刺激装置进行tDCS刺激。4.通过Western blotting以及免疫荧光技术对P2X3受体的表达进行定量和定位分析。5.运用脑片膜片钳技术记录岛叶皮层神经元细胞的兴奋性以及突触传递的特征。实验结果1.NMD大鼠岛叶皮层中P2X3受体的表达明显上升,并且与Neu N标记的神经元共定位,而与星形胶质细胞和小胶质细胞的标记物没有共标。2.P2X3受体拮抗剂A317491明显翻转NMD大鼠的CRD阈值,并能显著降低NMD大鼠IC区神经元s EPSC和m EPSC的频率,对幅度变化没有影响。3.P2X3受体激动剂α,β-ATP能够显著提高正常大鼠IC区神经元s EPSC和m EPSC的频率,对其幅度的变化没有显著影响。4.tDCS能够明显增加NMD大鼠的CRD阈值。5.tDCS能够显著降低NMD大鼠IC区神经元的兴奋性,以及s EPSC与m EPSC的频率,而对其幅度的变化没有显著影响。6.tDCS能够显著降低NMD大鼠IC区P2X3受体的表达。实验结论IC区P2X3受体参与NMD大鼠内脏痛敏;tDCS通过介导P2X3受体的表达下调来降低岛叶皮层中神经元s EPSC和m EPSC的频率,从而缓解NMD大鼠的内脏痛敏。