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背景与目的:RANKL/RANK/OPG系统是在破骨细胞分化、激活和凋亡过程中的一个重要信号调节系统。这一系统不仅参与调节生理性骨重建,也与病理状态下多种骨病的发生密切相关。研究发现体内多种激素和细胞因子等均直接或间接地调节该系统的表达,调控细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)二者之间的平衡,从而介导破骨细胞的分化和功能,达到影响骨代谢的作用。研究发现,滑膜病变与一些引起关节内骨质破坏的炎性关节疾病(如:类风湿关节炎等)密切相关。在人工关节置换术后,假体与骨之间形成的界膜与假体无菌性松动关系密切,而该膜的细胞构成与滑膜有许多相似之处。因此,本实验选用滑膜作为研究对象。TNF-α是目前发现的一种强有力的骨吸收诱导剂。研究发现,TNF-α可调节RANKL和OPG的表达。在一些炎性关节疾病和发生人工关节无菌性松动的周围组织中,TNF-α的水平是明显升高的。尽管对骨溶解的原因已有许多研究,但对其机制一直不十分明确。因而,探讨TNF-α对人关节滑膜细胞中RANKL、OPG表达的影响,对于在细胞外分子信号传递水平进一步阐明关节内骨质破坏疾病和人工关节无菌松动的机理,并初步探索其预防及治疗的药物作用靶点有着重要的意义。实验方法:采用组织块原代培养法分离人膝关节滑膜细胞并进行培养,通过形态学和免疫细胞化学方法观察滑膜细胞生长情况。半定量RT-PCR方法检测不同浓度TNF-α作用不同时间后滑膜细胞RANKL和OPG mRNA水平表达的变化。结果:组织块法成功的培养出了人滑膜细胞,其中抗CD68阳性细胞占1%左右,符合巨噬细胞样滑膜细胞的特征;抗Vimentin阳性细胞达99%以上,符合成纤维细胞样滑膜细胞的特征。TNF-α能刺激人滑膜细胞RANKL和OPG mRNA的表达。同时,TNF-α浓度在10ng/ml时RANKL/OPG比值较对照组升高(P<0.01),并且TNF-α作用12h和24h时,RANKL/OPG比值均明显高于对照组(P<0.01)。结论:滑膜细胞RANKL和OPG在mRNA水平随着TNF-α浓度的增加和作用时间的延长而表达增多,但是在一定浓度的TNF-α作用一定时间后RANKL增加的幅度比OPG大,所以RANKL/OPG的比值是升高的。故TNF-α在一定浓度和时间能够通过上调RANKL/OPG浓度比,影响RANKL/RANK/OPG信号系统的平衡,从而可能参与影响病变关节周围骨破坏。这或许可以为伴随骨质破坏的炎性关节疾病和人工关节无菌性松动的防治提供一条思路。