研究背景:血栓形成由血小板活化和凝血系统激活两个关键环节组成。动脉血栓形成可以引起危重血管性疾病,如缺血性脑卒中和急性心肌梗死等,严重威胁着人类的生命健康。根据Lancet杂志在2017年的报道,心脑血管性疾病仍是造成全球人口死亡的最主要原因。目前,临床上有效地治疗血栓性疾病的药物很少,其主要原因是对血栓形成机制的认识远远不足。因此,阐明血栓形成的机制,对于防治心脑血管血栓性疾病及降低其死亡率,具有极为重要的临床意义。近年来,多项研究表明,蛋白二硫键异构酶家族参与血栓形成,存在于内质网中,主要负责新生肽链的折叠,其中部分成员是催化巯基-二硫键相互转换的氧化还原酶,在调控底物蛋白的构象和功能中发挥重要作用。目前对于调控血栓形成的研究主要集中在分泌型蛋白二硫键异构酶,如PDI、ERp72、ERp57和ERp5,对于跨膜型蛋白二硫键异构酶的研究甚少。研究目的:观察和评价TMX4缺陷在血小板活化和动脉血栓形成中的表型,认识TMX4调控血小板活化和动脉血栓形成的作用,并初步探究其作用机制。研究方法:我们构建了 TMX4组织特异性敲除小鼠,运用PCR技术、RT-PCR技术和western blotting技术,鉴定TMX4基因的敲除效率;通过比较对照小鼠和TMX4组织特异性敲除小鼠尾巴出血时间,判定TMX4是否在止血过程中发挥作用;应用流式细胞术,检测静息和活化的TMX4缺陷血小板表面主要功能性受体的表达和活化情况;运用比浊法和荧光法,分别研究TMX4缺陷血小板的聚集和ATP释放能力;最后运用氯化铁诱导的肠系膜动脉损伤模型和激光诱导提睾肌微动脉血栓损伤模型,观察和比较对照组和敲除组的血栓形成差异,判定TMX4在体内血栓形成中的作用。研究结果:(1)TMX4在人血小板、白细胞和内皮细胞表面均有表达。(2)Pf4-Cre/TMX4fl/fl小鼠和Tie2-Cre/TMX4fl/fl小鼠的血小板TMX4表达缺失,Tie2-Cre/TMX4fl/fl小鼠白细胞和内皮细胞TMX4表达缺失。(3)与对照组TMX4fl/fl小鼠相比,Pf4-Cre/TMXfl/fl小鼠尾巴出血时间显著性延长。(4)TMX4缺陷血小板的聚集和ATP释放能力显著下降。(5)TMX4缺陷血小板在活化之后,P-selectin表达和整合素αⅡbβ3活化显著受到抑制。(6)在氯化铁诱导的肠系膜动脉损伤模型中,与对照组TMX4fl/fl小鼠相比,Tie2-Cre/TMX4fl/fl小鼠血小板在损伤部位的积聚明显较少。(7)在激光诱导提睾肌微动脉损伤模型中,与对照组TMX4fl/fl小鼠相比,Tie2-Cre/TMX4fl/fl小鼠血管损伤部位的血小板积聚和纤维蛋白生成显著减少。研究结论:1.TMX4在血小板活化中发挥重要的正性调控作用。2.TMX4调控体内血小板积聚和凝血系统的活化。