背景和目的 胆囊肿瘤是危害人民身体健康的主要疾病之一，在腹部外科中占有极重要的地位。胆道恶性肿瘤在我国消化道肿瘤中居于第5位。每年约有4500人死于胆道肿瘤。由于胆道恶性肿瘤早期诊断比较困难，而且发生部位邻近于门静脉和肝动脉等重要血管，容易浸润肝实质、胰腺及肝部大血管、且癌组织恶性程度高、尽管联合应用以手术为主的综合治疗手段，胆囊癌患者的预后并无明显改善，原因在于胆囊癌的发生发展是多基因改变、多阶段的复杂过程。因此，深入研究胆囊癌分子生物学特征，对胆囊癌的早期诊断、治疗及改善预后具有重要意义。 细胞凋亡是机体重要的生理过程，起着维持内环境稳定的关键作用。凋亡调节紊乱有助于细胞的恶性转化和肿瘤的进展。研究调亡的调节机制对于弄清肿瘤包括胆囊癌在内的发病机制及提供新的肿瘤防治措施具有重要意义。调亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein，IAP)是抑制细胞凋亡的重要成分。Survivin是一个独特的哺乳类IAP分子，被认为在bcl-2的下游阻断了半胱氨酸蛋白酶Caspase-3和Caspase-7凋亡调节通路，与其它IAP分子不同。Survivin在正常组织中不表达，而在几乎所有被研究的肿瘤中表达，尽管表达水平各异。这为肿瘤的基因治疗提供了一个新的靶点。而Survivin独特的亚细胞分布，更是所有已知调亡调节物中独一无二的，这一结构提示了survivin可能作为细胞增殖和细胞调亡界面的分子。目前，关于Survivin在胆囊癌中的表达尚无报道，其与临床病理特征的关系尚无定论，本组着重探讨细胞凋亡抑制基因Survivin在胆囊癌组织中的表达及其与p53与bcl-2表达的相关性。 方法 一、实验材料 标本来源于中国医科大学第一临床医院、第二临床学院普外科2001年11月-2002年4月手术的54例患者，其中男16例，女38例。年龄41～78岁，胆囊癌患者34例，慢性胆囊炎患者10例，胆囊良性息病患者10例。对胆囊癌患者进行Nevin分期，其中I期1例，n期14例，111期n例，W期3例，V期5例。按病理形态学分为:腺癌33例，腺鳞癌1例。按分化程度分为:高、中分化癌23例，低分化未分化癌n例。有淋巴结转移者12例，伴有胆囊结石13例。所有患者均为原发性胆囊癌，术前均未接受过化疗或放疗等任何治疗。 二、实验方法 1.免疫组化法检测survivin、户3、玩卜2蛋白表达 切片采用链霉菌素抗生素蛋白一过氧化酶连接(SP)免疫组织化学方法，一抗Survivin鼠抗人单克隆、户3鼠抗人单克隆、bcl一2鼠抗人单克隆即用型抗体，SP试剂盒为福州迈新公司产品。实验步骤按试剂盒说明书进行。将已知阳性肝癌切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。在光学显微镜下观察，组织切片中显示胞核或胞浆染为淡黄至棕黄色者为阳性细胞标志。 2、统计学处理 所得数据用阳性率(%)表示，经X，检验，用sPsS10.0软件完成。结果 一、胆囊癌、胆囊良性息肉和慢性胆囊炎组织中Survivn蛋白的表达 Survivin蛋白表达阳性染色主要定位于肿瘤细胞胞浆中，为粗细不一的棕黄色颗粒。胆囊良性息肉和慢性胆囊炎组织中未见Survivin蛋白表达，而34例胆囊癌组织中21例Survivin蛋白表达阳性，占61 .76%。 二、胆囊癌组织Survivin蛋白表达与患者临床病理特征的关系 Survivin蛋白表达与胆囊癌患者年龄、性别、伴否结石、分化程度临床分期、淋巴结转移均无明显相关关系。 三、胆囊癌组织Soivin蛋白表达与户3、bcl一2蛋白表达的相关性 p53蛋白阳性产物积聚在肿瘤细胞核中。胆囊癌组织中Survivin蛋白表达与p53蛋白表达密切相关，巧3蛋白表达阳性、阴性者中，survivi。蛋白表达阳性率分别为68 .42%(13/19)，26.67%(4/l5)，两者比较差异有显著性(P<0.05)。bcl一2蛋白阳性产物主要定位于细胞浆中。胆囊癌组织中Survivin蛋白表达与bcl一2蛋白表达密切相关，bcl一2蛋白表达阳性、阴性者中，survivin蛋白表达阳性率分别为86.96(20/23)、36.37%(4/11)，两者比较，有显著差异性(p<0.01)。讨论 凋亡抑制延长了细胞的寿命，有利于突变的积累，是恶性肿瘤形成的重要机制之一。人体细胞凋亡抑制蛋白(human inh山itor。f apoptosis protein，hI”)是抑制细胞凋亡的重要成份，这一蛋白家族抑制细胞凋亡的作用远大于bcl一2家族。尽管没有hIAP导致肿瘤的直接证据，但在肿瘤的发病机制中起着重要作用。S二ivin是最近发现的一种新的hIAP家族成员之一，只含有一个N末端的部分保守的杆状病毒凋亡抑制蛋白重复区序列(baeulovirus IAP reveat，BIR)区，缺少一个梭基末端的环指结构。Survivin的抗凋亡功能可以通过抑制Caspase一3和Caspase一7前体的激活或直接抑制了半胧氨酸蛋白酶Caspase一3和Caspase一7的活性来阻止细胞凋亡。这一功能可能是通过与有丝分裂的微管聚合和解聚来实现的。此外，Sul-vivin还可能通过抑制细胞色素C的释放在线粒体水平参与抗凋亡。由于独特的结构、分布和明显的抗凋亡功能，Survivin越来越受到学者们的瞩目。 Survivin蛋白表达具有高度