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【目的】:原代培养人牙周膜成纤维细胞,建立人牙周膜成纤维细胞的体外模型;观察在不同浓度组的IL-1β干预下,肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在人牙周膜成纤维细胞中的表达状况,为细胞因子网络对细胞功能的调控提供新资料。【方法】:利用组织块培养法对人牙周膜成纤维细胞进行体外分离培养,并对其进行形态学及免疫组织化学鉴定。选取5～8代生长稳定的人牙周膜成纤维细胞,分别以0ng/ml、0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的IL-1β对细胞进行干预,采用逆转录多聚酶链反应法及免疫组织化学方法检测TRAF6在细胞中的表达状况,利用计算机图像分析系统对检测结果进行图像及数据的采集,并对实验数据采用单因素方差分析法进行统计分析,观察TRAF6在不同浓度的IL-1β干预下在细胞中的定位及表达特点。【结果】:(1)人牙周膜成纤维细胞培养并传代成功,5代后细胞生长稳定,倒置显微镜下观察,细胞为星形或长梭形,为典型的成纤维样细胞形态;免疫组织化学染色观察,细胞抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性,符合人牙周膜成纤维细胞的生物学特性。(2)RT-PCR及免疫组化结果显示:在基因及蛋白水平上,TRAF6在正常的人牙周膜成纤维细胞中未见阳性表达,而在IL-1β干预后的细胞中可见胞浆表达阳性,且其表达强度随IL-1β干预浓度的升高呈现增强的趋势。【结论】:(1)组织块培养法培养细胞步骤简单易掌握,培养出的细胞符合牙周膜成纤维细胞的形态学及免疫学特征,细胞生长稳定,状态良好,可以作为细胞模型为进一步研究细胞因子网络对细胞功能的调控提供实验基础。(2)实验在基因和蛋白水平上证明了TRAF6参与了牙周膜成纤维细胞内IL-1β介导的信号转导过程,作为细胞因子网络的一员参与了牙周膜成纤维细胞的细胞功能调控,为牙周病的诊断、治疗提供了新思路。