本课题旨在建立大肠杆菌表达的重组新蛭素(Neorudin，EH)的生产工艺，并对分离纯化获得的EH蛋白进行初步质量检测、结构确证等方面的研究，以适应将来的产业化。　　发酵工艺的建立和优化采取了从低密度到高密度发酵的优化，高密度发酵主要从发酵罐培养基、诱导时间、发酵温度、诱导剂终浓度四个方面来进行优化;发酵罐培养基考察了LB培养基、TB培养基，诱导时间考察了4、5、6、7、8h对目的蛋白表达的影响，发酵温度主要考察了37℃、30℃对发酵的影响，诱导剂终浓度考察了0.5 mmol/L到1 mmol/L对蛋白表达的影响。通过SDS-PAGE、Western blot、Lowry法来检测目的蛋白的表达，发现发酵罐培养基为TB培养基，37℃培养，诱导4h为发酵的最佳条件，发酵结束时，菌体OD600可达到40左右，离心得菌体湿重可达70 g/L左右，目的蛋白表达量约400 mg/L。　　目的蛋白的提取考察了超声破碎和反复冻融的方法;根据EH的等电点采用SP Sepharose Fast Flow阳离子交换层析和Source15Q阴离子交换层析;最后对纯化所得产品用Western blot鉴定，HPLC检测其纯度，凝块法检测其抗凝比活性，鲎试剂来检测细菌内毒素;结果发现通过反复冻融获得的目的蛋白纯度较高，反复冻融上清离心后经过两步离子交换层析后纯化所得目的蛋白，经过HPLC检测，纯度大于97％，细菌内毒素含量小于0.5 EU/mg，纯化产物抗凝比活性为1024ATU/mg。符合EH质量要求。　　最后对纯化产品进行结构确证，包括高分辨率质谱、C-末端测序、N-末端测序、二硫键分析。检测结果发现:EH分子质量约为7415.1880 Da，N-末端、C-末端均与理论序列相符，含有六个半胱氨酸，三对二硫键，与理论序列相符。从而建立了一条简便可行的大肠杆菌表达的注射用重组新蛭素的生产工艺。