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第一部分早产儿视网膜病变小鼠模型的建立
目的:建立符合早产儿视网膜病变(retinopathyofprematurity,ROP)病理特点的小鼠模型。方法:7同龄C57BL/6J新生小鼠16只作为单纯给氧组,置于氧浓度75﹪的容器内连续饲养5天至小鼠12日龄,再置于正常空气环境下饲养至17日龄:16只同龄新生小鼠在正常空气环境下饲养至17同龄作为对照。两组的视网膜铺片经二磷酸腺苷酶(adenosinediphosphatase,ADP酶)染色后比较视网膜血管形态差异,观察并计数眼球切片中突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数目。结果:单纯给氧组17日龄小鼠视网膜见大片无灌注区,血管部分闭塞,分支减少,分布较紊乱;对照组同龄小鼠视网膜血管分布均匀规则,无闭塞。单纯给氧组17日龄小鼠平均每个眼球切片中突破视网膜内界膜的内皮细胞核数为(23.65±1.98)个,较对照组显著增多。结论:该小鼠模型具有类似ROP的血管无灌注区、血管闭塞、新生血管形成等改变,重复性好、可定量研究,是研究ROP比较合适的动物模型。
第二部分Avasfin抑制早产儿视网膜病变新生血管的实验研究
目的:观察Avastin对ROP小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法:7日龄C57BL/6J新生小鼠150只,分为5组,每组30只,置于氧浓度75﹪的容器内连续饲养5天至小鼠12日龄,再置于正常空气下饲养,其中三组幼鼠于12日龄时玻璃体腔内分别注射Avastin2ul、lul、2ul,对侧眼注射相同体积的平衡盐溶液(balancedsaltsolution,BSS)作为对照;其余两组于17日龄时玻璃体腔内分别注射Avastin2ul、lul,对侧眼注射相同体积的BSS作为对照。二磷酸腺苷(adenosinediphos-phate,ADP)酶染色法视网膜铺片,了解视网膜血管改变;视网膜切片HE染色,计数小鼠视网膜新生血管内皮细胞核数,并加以比较;免疫组织化学法检测各组小鼠视网膜切片VEGF的表达,RealtimePCR检测VEGFmRNA的表达;westen—blotting检测磷酸化VEGF受体含量。结果:与对照组相比,治疗组视网膜血管分布规则、密度减少,突破视网膜内界膜的内皮细胞细胞核数目明显减少(P<0.001),而大、小剂量治疗组相比较无明显差异(P>0.05);高氧组不论是否用Avastin治疗,不论Avastin的剂量大小,VEGF表达强度及VEGFmRNA表达量均无明显差异(P>0.05);与对照组比较,大、小剂量组磷酸化VEGF含量明显减少(P0.05)。结论:Avastin能有效抑制ROP小鼠视网膜新生血管形成,并能对已形成的新生血管起明显的消退作用,可能成为治疗ROP的一种新方法。