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血管内皮生长因子(VEGF)是肿瘤血管新生过程中的重要因子，是抗血管新生的肿瘤基因治疗的重要靶点，本论文旨在建立和评估抑制血管内皮生长因子表达的锤头状核酶(hammerheadribozyme)技术系统，探讨该系统在抗血管新生的肿瘤基因治疗中可能的应用。
为了建立和评估抑制血管内皮生长因子表达的锤头状核酶技术系统，我们运用了如下技术手段：1，对VEGFl21基因mRNA序列进行二级结构分析，选择靶点；2，设计并构建针对VEGF的分泌肽mRNA的可表达锤头状核酶(1—4)载体系统和VEGF一荧光色素酶融合基因报告质粒；3，通过试管内切割实验等方法评估核酶对于试管内转录得到的VEGFRNA切割有效性和效率；4，通过瞬时共转染实验和稳定转染实验评估核酶在细胞内对于VEGFmRNA的切割效率；5，通过构建缺陷型腺病毒导入系统评估核酶在细胞内对于mRNA的切割效果；6，通过稳定表达核酶的细胞株的裸鼠成瘤实验评估抑制VEGF对于肿瘤形成和生长的作用。
研究结果显示：1，设计和构建了对VEGFl2lmRNA二级结构水平上的暴露区(+8，+36，和+71位点：核酶1，3和4)和非暴露区(+17：核酶2)四个锤头状核酶(1～4)质粒；2，试管内切割检测表明，针对+8，+36，和+71位点的核酶(1，3和4)可以有效地在试管内对VEGF121RNA进行特异性切割，使其水平分别降至对照的61．7％，27．6％和44．8％(荧光色素酶活性)或66．3％,27．0％和30．0％(蛋白质水平)；3，将核酶表达质粒与VEGF-LUC模板质粒瞬时共转染入SMMC一7721肝癌细胞，核酶1，3和4VEGF—LUC水平分别降低到对照的81．4％，56．6％和69．1％；4，稳定表达针对VEGF的核酶1，3或4的SMMC一7721细胞株中，内源性VEGFRNA的水平降至对照水平的5％；5，构建了复制缺陷型腺病毒核酶导入系统；6，稳定表达核酶的细胞株裸鼠成瘤实验显示，核酶3号可以抑制肿瘤的生长。
综上，我们构建的分别针对VEGFl2l+8，+36，和+71位点锤头状核酶可有效地抑制VEGF的RNA水平，针对+36位设计的锤头状核酶抑制效果最好。