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目的：近年来肥胖的发病率显著增加,对人类的健康产生了严重危害。肥胖症的危害不仅在于其本身会影响人类健康,而且它还会引起许多代谢紊乱性疾病。由于肥胖病因病机的复杂性,目前还没有安全有效治疗肥胖的手段。中药以其多成分、多靶点、多层次整体协同发挥调脂作用,且具有不良反应少等优势,成为目前减肥药物研发的热点之一。因此深入研究中药降脂作用机制和药效物质基础,对中药减肥药物的研发具有重要意义。多穗柯,又名甜茶,主要来源于壳斗科石柯属植物Lithocarpus polystachyrus Rehd的干燥叶,是我国南方山区广泛用于降血脂、降血糖的一种传统中草药。本课题旨在前期试验的基础上,进一步验证多穗柯对不同肥胖小鼠模型糖脂代谢干预作用,探讨其改善肥胖糖脂代谢异常的分子作用机制,并对多穗柯体内外成分进行分析,以期阐明真正药效成分,为多穗柯最终开发成新一代天然减肥药物提供科学依据。方法与结果：1、多穗柯干预肥胖小鼠糖脂代谢研究采用营养性肥胖C57BL/6J小鼠和遗传性肥胖db小鼠模型,以多穗柯总提物分别进行口服干预14周和15周,观察药物对肥胖小鼠体重、腹围、Lee’s指数、葡萄糖耐量、胰岛素耐量、空腹血糖、血脂四项及游离脂肪酸等指标的影响,同时观察其对肝脏、胰腺的影响。结果表明多穗柯能明显减轻营养性肥胖小鼠和基因决定型肥胖小鼠的体重,减小腹围,降低Lee’s指数,并能降低两种肥胖小鼠空腹血糖,改善糖耐量异常,降低血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL)游离脂肪酸水平(FFA),升高高密度脂蛋白(HDL)水平,此外多穗柯还能改善肥胖引起肝脏和胰腺的病变。2、多穗柯干预肥胖小鼠糖脂代谢信号通路的影响采用Western blot法检测肝脏组织中p38MAPK/mTORC1/p70S6K通路相关蛋白的表达和其磷酸化水平,结果显示多穗柯能上调营养性肥胖小鼠肝脏组织p-p38MAPK蛋白表达水平,下调p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达水平；同样多穗柯能上调基因决定型肥胖小鼠肝脏组织p-p38MAPK蛋白表达水平,下调p-mTOR、raptor、p-p70S6K蛋白表达水平。3、多穗柯及其含药血浆对脂肪变性肝细胞糖脂代谢的影响采用MTT法测定多穗柯总提物及其含药血清对正常肝细胞的毒性,确定剂量范围,采用油酸诱导L02肝细胞建立脂肪变性肝细胞模型,以多穗柯总提取物及其含药血清进行干预,观察药物对脂肪变性肝细胞内脂滴的变化,细胞内总胆固醇(TG)、甘油三酯(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平的影响,结果显示多穗柯总提物对脂肪变性肝细胞的脂滴大小和数目、TG、TC、ALT和AAST水平降低作用不明显,但其含药血浆能明显降低脂肪变性肝细胞的脂滴大小和数目,降低TG、TC、ALT和AST水平。4、多穗柯药效成分分析采用液质联用(UPLC-MS)对多穗柯总提物中成分和多穗柯口服给药后大鼠血浆,尿液以及粪便中代谢成分进行全面比较分析,体内分析条件如下：色谱柱Aglient SB-C18 (1.8μm,4.6×100 mm);流动相0.1%HCOOH(A)-CH3OH(B) (0-35 min,30%-60%B)梯度洗脱；柱温：30℃；检测波长：230 nm；流速：0.3 mL/min；进样量：10μL。质谱条件：电喷雾离子源(ESI-)；扫描方式：负离子Data dependant多级扫描;离子扫描范围：125-800；分辨率：一级质谱30000,二级质谱：15000,三级质谱：IT模式；碰撞能量：35%；喷雾电压：3.0 kV；鞘气(氮气)：50 arb；辅助气10 arb；毛细管电压：-35.0 V；毛细管温度：325.0℃。通过对多穗柯总提物质谱图分析,初步鉴定了72个成分,包括57个黄酮类、11个酚酸类和4个酰胺类化合物,其中8个黄酮苷和1个酰胺为指标性成分,且二氢查耳酮苷含量最大；通过对原形和非原形入血成分比较分析,发现大鼠口服多穗柯提取物后,药材中主要的二氢查耳酮成分如根皮苷、三羟基根皮苷在血中未检测到,而其血中主要移行成分为根皮素和三羟基根皮素的葡萄糖醛酸和磺酸化等Ⅱ相代谢产物；多穗柯总提物给药后收集的大鼠尿液经分析主要代谢成分也为根皮素和3一羟基根皮素的Ⅱ相代谢产物,但其粪便中只检测到了二氢查尔酮苷元根皮素和3一羟基根皮素。结论：多穗柯能够减轻营养性肥胖小鼠和遗传性肥胖小鼠的体重,降低血糖血脂水平,改善糖脂代谢相关的肝脏、胰腺病变,从而改善2种小鼠的糖脂代谢异常,其作用机制可能是多穗柯能激活肝脏中p38 MAPK蛋白,p38 MAPK蛋白通过负调控抑制mTORC1复合物的表达,从而抑制其下游效应蛋白p70S6K1的磷酸化来改善肥胖小鼠的糖脂代谢异常。进一步细胞实验研究发现多穗柯含药血清能显著改善变性肝细胞的肝功能损伤和肝糖脂代谢异常,但多穗柯总提物体外作用不明显,对多穗柯总提物及其含药血浆成分进行比较分析发现多穗柯口服后血中主要移形成分并非总提物中的原形成分,而是根皮素和三羟基根皮素的葡萄糖醛酸和磺酸化产物等Ⅱ相代谢产物,说明这些Ⅱ相代谢产物可能是多穗柯在体内的药效成分。