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目的:原代分离培养心肌微血管内皮细胞(Cardiac Microvascular Endothelial Cells,CMEC),并通过免疫荧光法鉴定。高糖、血管紧张素Ⅱ分别处理成功培养的CMEC24小时后,观察CMEC表达神经调节蛋白-1(NRG-1)的变化,并探讨糖尿病心肌病发病的可能机制。方法:(1)心肌微血管内皮细胞培养与鉴定:取4天龄健康、清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠,无菌取心脏组织,胶原蛋白酶Ⅰ消化,对消化后分离的有核细胞贴壁法培养获得CMEC,待原代内皮细胞长成融合单层后,去除培养液并传代。取第二代CMEC通过免疫荧光检测内皮细胞的重要标志物FVIII-RA、CD31-RA。(2)高糖、血管紧张素Ⅱ分别处理成功培养的CMEC:实验分为实验A和实验B两部分。实验A:对照组:单纯心肌微血管内皮细胞培养;实验1组,培养液中加葡萄糖(10mmol/L);实验2组,培养液中加葡萄糖(10mmol/L)+胰岛(10-5U/L)。分别培养24小时后收集CMEC。实验B:对照组:单纯心肌微血管内皮细胞培养;实验1组,培养液中加血管紧张素Ⅱ(100nmol/L);实验2组,培养液中加血管紧张素Ⅱ(100nmol/L)+缬沙坦(10μmol/L)。分别培养24小时后收集CMEC。RT—PCR检测NRG-1 mRNA的表达及Western blot检测NRG-1蛋白的表达。结果:(1)培养原代心肌微血管内皮细胞,细胞纯度达95%左右,呈典型的铺路卵石样结构;(2)免疫荧光法,显示Ⅷ因子、CD31主要分布在胞浆中,分别呈红色荧光和绿色荧光;(3)单纯葡萄糖组NRG-1 mRNA和NRG-1蛋白的表达明显下降,与对照组和实验2组比较具有统计学差异(P﹤0.05);与对照组相比,实验2组NRG-1 mRNA和NRG-1蛋白的表达减少,但无统计学意义(P>0.05)。(4)单纯血管紧张素Ⅱ组NRG-1 mRNA和NRG-1蛋白的表达明显下降,与对照组和实验2组比较具有统计学差异(P﹤0.05);与对照组相比,实验2组NRG-1 mRNA和NRG-1蛋白的表达减少,但无统计学意义(P>0.05)。结论:高糖和血管紧张素Ⅱ抑制心肌微血管内皮细胞表达NRG-1 mRNA和NRG-1蛋白,胰岛素和缬沙坦可分别拮抗此作用。