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本研究以雄甾-4-烯-3,17-二酮(4AD)和阿维菌素为底物进行生物转化,期望获得活性先导化合物,取得如下结果。
1、经过50株菌株的筛选,得到对4AD具有高效转化能力的菌株IA2,以该菌株建立生物转化体系,分离提取得到三个转化产物,分别为睾内酯酮、雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮和宝丹酮,初步统计三个转化产物的得率分别为80.72%、17.15%和2.12%,通过生物转化体系的优化研究,获得该得率最佳底物浓度0.5~0.8g/L,转化时间10~12天,葡萄糖浓度20g/L,pH自然。
2、采用形态学和分子生物学方法对4AD生物转化IA2菌株进行分类学鉴定,根据菌株的菌落、菌丝体、分生孢子梗和孢子等形态特征进行鉴定,表明该菌属于Plectosphaerella属。根据18SrDNA和ITS-5.8SrDNA基因序列特征进行分子鉴定,依据测序结果建立系统发育树,结果表明该菌属于Plectosphaerella cucumerina。综合形态和分子鉴定,确定IA2菌株属于P.cucumerina。
3、利用长春花悬浮细胞体系对阿维菌素进行生物转化,并对转化产物进行分离纯化,得到二个转化产物Avermectin-1和Avermectin-2,通过氢谱、炭谱和相关二位谱等数据分析,初步确定两个转化产物的分子结构。
1、经过50株菌株的筛选,得到对4AD具有高效转化能力的菌株IA2,以该菌株建立生物转化体系,分离提取得到三个转化产物,分别为睾内酯酮、雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮和宝丹酮,初步统计三个转化产物的得率分别为80.72%、17.15%和2.12%,通过生物转化体系的优化研究,获得该得率最佳底物浓度0.5~0.8g/L,转化时间10~12天,葡萄糖浓度20g/L,pH自然。
2、采用形态学和分子生物学方法对4AD生物转化IA2菌株进行分类学鉴定,根据菌株的菌落、菌丝体、分生孢子梗和孢子等形态特征进行鉴定,表明该菌属于Plectosphaerella属。根据18SrDNA和ITS-5.8SrDNA基因序列特征进行分子鉴定,依据测序结果建立系统发育树,结果表明该菌属于Plectosphaerella cucumerina。综合形态和分子鉴定,确定IA2菌株属于P.cucumerina。
3、利用长春花悬浮细胞体系对阿维菌素进行生物转化,并对转化产物进行分离纯化,得到二个转化产物Avermectin-1和Avermectin-2,通过氢谱、炭谱和相关二位谱等数据分析,初步确定两个转化产物的分子结构。