结直肠癌是临床发病率逐年上升并严重威胁人类生命的恶性肿瘤,近年来,由于环境、遗传因素、生活方式、饮食结构的变化及社会心理因素的综合影响,结直肠癌的发病率及死亡率逐年攀升。目前大约每年有120万以上的病人被确诊为结直肠癌,其中高达60多万人死于结直肠癌。结直肠癌中男性病人所占比例高于女性,中老年患者所占比例高于青少年。目前观点认为结直肠癌是由正常的结直肠细胞经过基因的甲基化等修饰造成基因突变,逐渐由腺瘤恶变为癌症。目前广泛调查统计发现结直肠癌发病呈现由左向右发展的趋势。目前针对结直肠癌的治疗已经从最初的手术治疗发展为结合了手术治疗、化学治疗、靶向治疗等治疗方式的综合治疗。对外科手术治疗后的患者采用化疗可以有效的预防癌症复发,但是化疗本身又有不可避免的副作用,过度化疗对患者可能产生比癌症更为不利的影响。综上所述,能发现结直肠癌的有效生物标志物作为诊断和预测疾病的依据,为结直肠癌患者提供合理有效的治疗方案尤为重要。目前,结直肠癌的治疗方案和预后主要根据其临床病理分期判断。但是,根据调查统计发现分期一致的患者生存时间长短差别却很大,一些分期尚好的患者术后较早的出现了癌症的复发。近些年来,结直肠癌的分子标志物成为热点,研究发现的分子标志物层出不穷,但往往特异性较差,临床应用价值较低。因此,寻找特异性较好、临床应用价值较高的分子标志物成为研究热点。生长因子受体结合蛋白2(growth factor receptor bound protein 2,GRB2)作为一种在酪氨酸激酶受体信号通路发挥重要衔接作用的蛋白,其表达水平的高低直接影响细胞的增殖、分化。在目前发表的文献中证实GRB2在多种恶性肿瘤中均有异常表达,并且对患者的生存预后、治疗方案有指导意义。本研究采用了我院样本量较大、病历较完整、随访时间相对较长的临床病理样本及患者相关资料,用免疫组织化学、RT-PCR以及Western-blot技术及方法,探究GRB2蛋白与结直肠癌发生及预后的关系。第一部分GRB2的表达与结直肠癌发生及预后的关系目的:评价生长因子受体结合蛋白2(GRB2)表达水平与结直肠癌发生及预后的相关关系。方法:利用我院普外科建立的结直肠癌组织芯片(其中341例具有完整的复发及生存信息)对GRB2的蛋白表达及细胞定位进行免疫组化检测,结合患者的临床信息,用t检验、chi-square检验等比较GRB2的表达与年龄、性别、疾病部位、分化等级、淋巴结个数、TNM分期、辅助化疗、CEA和CA19-9之间的关系。运用Kaplan-Meier分析,研究GRB2的表达水平是否影响患者的生存时间;运用Cox回归的单因素和多因素分析模型,探究影响结直肠癌预后效果的因素。结果:GRB2主要表达于结直肠上皮细胞的胞浆,胞浆GRB2在结直肠癌组织中显著高于息肉和癌旁组织(P<0.01),而GRB2在胞核的表达水平无显著差异;癌上皮中胞浆GRB2高表达与年龄、性别、疾病部位、分化等级、TNM分期、辅助化疗、Serum CEA和Serum CA19-9之间均无关,胞浆GRB2高表达与淋巴结个数之间有显著差异。单因素分析发现胞浆GRB2高表达显著预测患者的不良预后,进一步纳入TNM分期等指标,多因素COX模型发现GRB2是结直肠癌独立的预后影响因素(无病生存HR=2.664,P=0.015;总体生存HR=2.574,P=0.019)。结论:GRB2高表达与结直肠癌发生密切相关,是结直肠癌预后不良的独立影响因素。第二部分GRB2促进结直肠细胞增殖能力目的:评价GRB2对结直肠细胞增殖能力的影响。方法:采用Western blot和RT-PCR法检测GRB2 siRNA转染效率;采用克隆形成和CCK8法检测GRB2敲低后结直肠癌细胞的增殖能力。结果:Western blot和RT-PCR法检测GRB2被显著敲低;克隆形成和CCK8法检测GRB2敲低组的结直肠癌细胞增殖能力明显弱于对照组。结论:GRB2促进结直肠癌细胞的增殖能力