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目的构建乏氧应答启动子调控的人钠/碘共同转运体hNIS报告基因重组质粒，并对其在人肺腺癌A549细胞株微环境乏氧检测中的应用进行初步研究，为实体瘤微环境乏氧的实时监测提供实验基础。方法（1）构建5个串联乏氧反应元件（HRE）核苷酸片段，定向克隆入pGL3-promoter载体中，构建为pGL3-promoter-5×HRE重组真核载体。然后将扩增的hNIS基因插入pGL3-promoter-5×HRE载体中，构建为pGL3-promoter-5×HRE-NIS重组质粒。通过RT-PCR检测载体中目的基因NIS的正确插入，并进行测序验证。（2）以DMSO处理组作为对照，CoCl2处理人胚肾HEK293细胞模拟乏氧；将经验证的pGL3-promoter-5×HRE-NIS质粒转染HEK293乏氧细胞，同时将根据乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）序列构建的pcDNA3.1-HIF-1α质粒和pGL3-promoter-5×HRE-NIS质粒按照3∶1比例转染HEK293细胞，共转染空质粒pcDNA3.1和pGL3-promoter-5×HRE-NIS质粒组作为对照。通过qRT-PCR法检测hNIS基因mRNA表达的变化；流式细胞术检测其蛋白水平表达变化。99m高锝酸盐（99mTcO4-）处理双质粒共转染的HEK293细胞，洗脱游离高锝酸盐后通过γ计数器采集细胞放射性计数检测所表达hNIS蛋白的功能。（3）用不同浓度CoCl2处理转染后细胞诱导乏氧，以脂质体法转染pGL3-promoter-5×HRE-NIS重组质粒于人肺腺癌A549细胞中，转染后用qRT-PCR法检测hNIS、HIF-1α基因mRNA表达的变化；免疫荧光染色观察其蛋白表达情况。同样条件下，用99mTcO4-处理细胞，洗脱游离高锝酸盐后用γ计数器采集细胞放射性计数。结果基因测序结果提示所构建含hNIS报告基因的质粒产物与预期一致，序列无碱基的突变。在人胚肾HEK293细胞，共转染HIF-1α质粒组及转染pGL3-promoter-5×HRE-NIS的CoCl2处理组，其hNIS基因的表达量明显高于转染空质粒及DMSO处理组。共转染HIF-1α质粒组细胞的99mTcO4-摄取率显著高于空质粒对照组（P <0.01）。在CoCl2诱导乏氧的人肺腺癌A549细胞中，转染pGL3-promoter-5×HRE-NIS真核表达载体后，低浓度CoCl2处理组hNIS、HIF-1α基因mRNA表达较空白对照组及高浓度处理组均明显增高（P <0.01），蛋白表达及核素摄取计数呈现一致变化趋势，且hNIS蛋白能正确表达于细胞膜上。结论（1）成功构建含有hNIS报告基因的pGL3-promoter-5×HRE-NIS重组质粒；（2）含hNIS报告基因的重组质粒转染正常人胚肾HEK293细胞后，外源性hNIS基因能间接反应HIF-1α基因表达，对低氧有响应；（3）模拟细胞微环境乏氧条件下，人肺腺癌A549细胞中转染含hNIS报告基因的重组质粒后，外源性hNIS基因能响应HIF-1α基因的表达，正确转录并表达跨膜蛋白，实现摄取放射性核素99mTcO4-的功能，为肿瘤细胞微环境乏氧的核素显像提供实验依据。