论文部分内容阅读
产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases，ESBLs)是导致肠杆菌科细菌对第三代头孢菌素耐药的最常见的机制。ESBLs是能够水解第三代头孢菌素和单环酰胺类抗生素的β-内酰胺酶。主要由大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生。在不同的国家、地区和不同的医院由于抗菌药物的使用不同，产ESBLs细菌的基因型也不同。为了解我省产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs基因型，我们对浙江省119株表型产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的CTX-M型ESBLs基因型分布情况进行了研究。 在本研究中，对119株实验室保存的1998年9月至1999年6月浙江省各个地区临床分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，采用聚合酶链反应(PCR)，扩增接合子和部分临床分离菌株(未接合成功的菌株)的耐药基因，其扩增引物包括CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-8组和CTX-M-9组。PCR扩增产物进行克隆测序，确定ESBLs基因型。对新发现的CTX-M-29基因进行原核表达，对重组表达菌进行ESBLs鉴定，采用等电聚焦电泳(Isoelectric Focus，IEF)测定表达蛋白的等电点。 结果显示，119株产ESBLs菌株中有110株产CTX-M型ESBLs，阳性率为92.44％，其中82株产CTX-M-14，12株产CTX-M-24，7株产CTX-M-22，2株产浙江大学2004届硕士学位论文CTX一M一9，产CTX一M一27、CTX一M一28、CTX一M一29各1株，4株同时产CTX一M一14与CTX一M一22。结合己完成的TEM型和SHV型p一内酞胺酶基因型研究结果(8株产SHV型ESBLs，包括7株SHV-12，l株SHV-5;未分离到TEM型ESBLs)，共有5株未能确定ESBLs基因型;有6株细菌同时产生两种ESBLs，1株细菌产三种ESBLs。CTX一M一29是一种新的p一内酞胺酶基因型，经原核表达，重组菌表型为产ESBLs菌株型以表达蛋白的等电点约为9.0。以上研究表明，浙江地区产ESBLS大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因CTX一M一14型为主;CTX一M一29是一种新基因型ESBLs，GenBank登录号为(AY267213);在国内首次报道了CTX一M一27，CTX一M一28型ESBLs的存在。