研究目的：
　　CD4+CD25+细胞是一群具有免疫抑制活性的T细胞，又称为调节性T细胞（Regulatory Tcells,Tregs）。大量研究表明，Tregs抑制肿瘤特异性效应T细胞是肿瘤实现免疫逃逸的重要途径之一，但迄今对Tregs在肿瘤发生过程中功能变化的确切性质仍不甚清楚。本文利用小鼠肺癌模型，比较了正常和荷瘤小鼠CD4+CD25+细胞移植对肿瘤生长和受体小鼠T细胞产生的影响，以期了解肿瘤发生中CD4+CD25+细胞功能变化的特征，为CD4+CD25+细胞干预作为肿瘤治疗方法的建立提供理论基础。
　　研究方法：
　　（1）构建肺癌模型小鼠：取对数生长期的Lewis肺癌细胞（Lewis lung carcinoma line,LLC）并用PBS将细胞浓度调整为2.5×106cell/mL，选用6-8周龄的C57BL/6J（CD45.1）小鼠，每只小鼠皮下注射0.2mL对数生长期的Lewis肺癌细胞，然后将小鼠正常饲养4周并测量肿瘤大小，取肿瘤直径不小于1.5cm的小鼠用于后续的实验；（2）小鼠脾脏单细胞悬液的制备：在处死小鼠之后，将小鼠解剖并且取出小鼠脾脏，将其放在DMEM完全培养基中捏碎，再使用红细胞裂解液处理，然后过滤重悬即可得到脾脏单细胞悬液；（3）CD4+CD25+细胞流式分选：脾脏单细胞悬液经7-AAD、CD4、CD25荧光抗体标记之后，使用流式细胞术分选纯化；（4）受体小鼠分组：受体小鼠分为6组，包括正常受体小鼠PBS-N、N-Tregs-N、T-Tregs-N和荷瘤受体小鼠PBS-T、N-Tregs-T、T-Tregs-T，其中荷瘤受体小鼠皮下注射0.2mL对数生长期的Lewis肺癌细胞，而正常组小鼠皮下注射等量PBS；（5）CD4+CD25+细胞移植：用PBS将分选得到的CD4+CD25+细胞的细胞浓度调整为1.25×105cell/mL，再通过尾静脉注射到受体小鼠体内，每只小鼠注射0.2mL；（6）绘制生存曲线：移植后，每日观察小鼠生存状态，记录小鼠生存期；（7）绘制肿瘤生长曲线：移植2周后，每隔一天测量一次小鼠肿瘤的长径（a）和短径（b），并通过公式V=1?2ab2计算小鼠的肿瘤体积；（8）流式分析：移植5周后，处死小鼠后制备小鼠外周血和脾
　　脏组织的单细胞悬液，随后使用流式细胞术分析两个组织中CD3+/CD3+CD4+/CD3+CD8+T细胞的细胞含量；（9）石蜡切片及HE染色：移植5周后，处死小鼠，解剖取出小鼠肺、脾脏、肝脏组织做石蜡切片，HE染色后对比其组织结构差异；（10）统计学方法：选用GraphPad Prism软件对本次所得实验数据进行统计分析，组间分析采用t检验，统计结果采用平均值±标准差（Standard Deviation,SD;Mean±SD）来表示，P＜0.05表示差异具有统计学意义。
　　研究结果：
　　（1）肿瘤条件下小鼠脾脏CD4+CD25+细胞含量的变化：为了确定肿瘤状态下CD4+CD25+细胞的含量变化，通过流式细胞术进行检测，结果显示，肿瘤状态下，小鼠脾脏CD4+CD25+细胞绝对数量显著增加；
　　（2）肿瘤条件下人外周血CD4+CD25+细胞含量的变化：利用流式细胞术检测健康志愿者和肺癌病人外周血淋巴细胞中CD4+CD25+细胞的含量，结果显示，肺癌病人外周血淋巴细胞中CD4+CD25+细胞含量显著增加；
　　（3）移植荷瘤和正常小鼠脾脏CD4+CD25+细胞对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响：移植5周后，与移植PBS对照组荷瘤小鼠相比，移植正常小鼠脾脏CD4+CD25+细胞的受体荷瘤小鼠肿瘤体积显著减小，而移植荷瘤小鼠脾脏CD4+CD25+细胞的受体荷瘤小鼠肿瘤体积显著增大；
　　（4）移植荷瘤和正常小鼠脾脏CD4+CD25+细胞对荷瘤小鼠生存期的影响：与移植PBS对照组荷瘤小鼠相比，移植正常小鼠脾脏CD4+CD25+细胞的受体荷瘤小鼠生存期延长，而移植荷瘤小鼠脾脏CD4+CD25+细胞的受体荷瘤小鼠生存期缩短；
　　（5）移植荷瘤和正常小鼠脾脏CD4+CD25+细胞对荷瘤小鼠外周血中T细胞的影响：与移植PBS对照组荷瘤小鼠相比，移植正常小鼠脾脏CD4+CD25+细胞的受体荷瘤小鼠CD3+/CD3+CD4+/CD3+CD8+T细胞显著增加，而移植荷瘤小鼠脾脏CD4+CD25+细胞的受体荷瘤小鼠CD3+/CD3+CD4+/CD3+CD8+T细胞显著减少；
　　（6）移植荷瘤和正常小鼠脾脏CD4+CD25+细胞对荷瘤小鼠脾脏中T细胞的影响：与移植PBS对照组荷瘤小鼠相比，移植正常小鼠脾脏CD4+CD25+细胞的受体荷瘤小鼠CD3+/CD3+CD4+/CD3+CD8+T细胞显著增加，而移植荷瘤小鼠脾脏CD4+CD25+细胞的受体荷瘤小鼠CD3+/CD3+CD4+/CD3+CD8+T细胞显著减少；
　　（7）移植荷瘤和正常小鼠脾脏CD4+CD25+细胞对荷瘤小鼠肺、脾脏、肝脏组织的影响：与移植PBS对照组荷瘤小鼠相比，移植正常小鼠脾脏CD4+CD25+细胞的受体荷瘤小鼠肺、脾脏、肝脏组织结构和形态正常，而移植荷瘤小鼠脾脏CD4+CD25+细胞则导致一系列病理变化，如细胞变小，细胞质减少，组织固有结构被破坏等。
　　研究结论：
　　本文利用小鼠肺癌模型和细胞移植技术，检查了不同来源（正常和荷瘤小鼠）CD4+CD25+细胞的功能特征。当以荷瘤小鼠作为移植受体时，移植正常小鼠脾脏CD4+CD25+细胞能够抑制肿瘤的生长，体现为肿瘤体积减小、小鼠生存期延长、小鼠T淋巴细胞含量增加。相反，移植荷瘤小鼠脾脏CD4+CD25+细胞则促进肿瘤的生长，如肿瘤体积增加、小鼠生存期缩短、小鼠T淋巴细胞含量下降。这些结果表明，CD4+CD25+细胞具有高度功能上的异质性，即在不同环境下其功能行为呈现迥异变化。生理状态的CD4+CD25+细胞可能通过弱化其他调节性细胞对T细胞的抑制作用而抑制肿瘤的生长；而荷瘤状态下，CD4+CD25+细胞细胞表现特征性和强化的免疫抑制作用，包括下调T细胞的产生和促肿瘤效应。