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戊型肝炎是一种重要的人兽共患病，主要流行于发展中国家，既有暴发流行也有散发病例，对人类健康造成威胁。戊型肝炎病毒（HEV）是无包膜的单股正链RNA病毒，包含三个开放阅读框（ORF）。其中HEVORF3编码约114个氨基酸的蛋白，蛋白的主要功能目前尚不确定。有研究表明它在病毒感染细胞而引发的信号转导过程中发挥着极其重要的作用，与各病毒流行株基因型间的差异性相关，对于HEV疫苗和诊断试剂盒的开发具有重要意义。本研究通过原核表达系统表达纯化了HEVORF3及其候选互作蛋白RPS11蛋白，并对两者的体外相互作用进行了初步探究，结果如下：本研究以基因4型HEVORF3的cDNA为模版，PCR扩增ORF3片段。选取pET28a、pGEX4T1、pET43a为原核表达载体，并构建His-pGEX4T1双标签表达载体。将酶切后带有粘性末端的载体和ORF3片段连接，转入大肠杆菌DH5α。将测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)，以IPTG诱导蛋白表达，SDS-PAGE分析表明4个融合蛋白均得到正确、高效表达。利用Ni-NTA对pET28a-ORF3进行纯化,BandScan5.0生物图像分析软件分析表明：表达的融合蛋白占菌体蛋白总量量的百分比为55.7%,纯化后融合蛋白的纯度为41.6%。利用GST柱对pGEX4T1-ORF3进行纯化,BandScan5.0分析表明：蛋白的表达量为68.8%,蛋白纯度为69.1%。带有His和GST双标签的His-pGEX4T1-ORF3蛋白通过Ni-NTA和GST柱两次纯化,分析表明融合蛋白的纯度得到了明显提高,达到93.8%。带有NusA促溶标签的pET43a-ORF3通过Ni-NTA纯化后,分析其蛋白表达量为62.3%,纯度为88.5%,而且融合蛋白(?)IusA-ORF3的可溶性表达较高。纯化的HEV ORF3蛋白为ORF3蛋白的结构和功能、与其受体蛋白相互作用及戊肝基因工程疫苗的研究提供了基础。通过PCR扩增RPS11基因,构建pET43a-RPS11和pGEX-4T-1-RPS11原核表达载体,将重组质粒转入大肠杆菌DH5a,菌液PCR筛选阳性结果。序列测定正确后,将其转入大肠杆菌BL21(DE3),加入IPTG诱导表达。经SDS-PAGE分析,融合蛋白均能够正确、高效表达。利用GST柱对pGEX4T1-RPS11蛋白进行纯化,BandScan5.0分析结果显示融合蛋白的表达量为24.6%,纯化的融合蛋白纯度为95.2%。利用Ni-NTA柱对pET43a-RPS11蛋白进行纯化,分析显示融合蛋白的表达量为48.3%,蛋白纯度为95.0%。通过GST Pull-down方法对纯化的ORF3和RPS11融合蛋白的体外相互作用进行了初步探究。为ORF3蛋白互作蛋白的筛选和鉴定奠定了基础。