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肠道屏障功能受损是造成仔猪腹泻和死亡的重要潜在原因。松树皮来源广泛,且富含多酚活性成分,松树皮多酚(PBP)清除自由基和抗氧化能力强,能够缓解仔猪肠道屏障功能损伤和肠道炎症的发生。本试验通过确定提取时间、料液比和酶的种类等主要工艺参数,建立了松树皮多酚的酶解提取工艺,通过LC-MS定性和定量分析,确定PBP的多酚组分和含量。通过建立LPS诱导猪肠上皮细胞(IPEC-J2)氧化应激模型,测定PBP对IPEC-J2细胞存活率和抗氧化性能的影响。选取28日龄的PIC仔猪36头,随机分为3个处理,基础日粮组(CTL)、金霉素组(AUR)和松树皮多酚组(PBP),每个处理6个重复。通过免疫组化和荧光定量PCR技术,测定PBP对紧密连接蛋白、抗氧化指标和炎症因子表达的影响,并观察仔猪肠道黏膜的形态变化。收集仔猪盲肠内容物和粪便,基于高通量测序技术,探讨PBP对仔猪肠道菌群多样性和组成的调节作用;基于Spearman相关性分析,研究PBP对仔猪肠道菌群的调控与缓解肠道炎症的相关性。主要结论如下:1松树皮多酚的酶解提取及LC-MS组分分析建立PBP的酶解提取工艺,确定了主要的提取工艺参数:采用漆酶、果胶酶和纤维素酶作为复合酶,提取时间3 h,料液比1:50,温度50℃,p H 4.0,在此条件下,松树皮多酚的得率为4.08%。通过LC-MS定性和定量分析测定,酶解提取法得到的PBP含有312种多酚物质,包括宝藿苷I、没食子酸、绿原酸和儿茶素等主要成分。2松树皮多酚缓解猪肠上皮细胞氧化应激的作用建立LPS诱导IPEC-J2细胞模型,添加PBP浓度高于40μg/m L,会显著降低IPECJ2细胞的存活率(P<0.05);添加10、20和30μg/m L的PBP,显著提高IPEC-J2细胞的总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)的活性(P<0.05),显著降低过氧化物丙二醛(MDA)的产生(P<0.05),适量浓度(低于30μg/m L)的PBP,可呈剂量依赖性提高IPEC-J2细胞的抗氧化能力。3松树皮多酚对仔猪生长性能和肠道屏障功能的影响仔猪日粮添加0.4%PBP,日增重有提高趋势(P>0.05)。PBP组仔猪肠绒毛皆粗、长且排列密集,十二指肠绒毛高度显著高于CTL组(P<0.05),PBP组和AUR组显著上调了肠道Claudin-1基因表达(P<0.05)。PBP组的血清T-AOC最高(P<0.05),GSH-Px最低(P<0.05);PBP组和AUR组的TBARS显著低于CTL组(P<0.05);PBP组的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平显著低于CTL组(P<0.05),且TNF-α的表达水平显著低于AUR组(P<0.05);各处理组间血清IL-2表达水平差异不显著(P>0.05)。以上结果表明,日粮添加0.4%PBP可显著缓解LPS诱导仔猪的肠道氧化应激,促进肠道健康水平。4松树皮多酚对仔猪肠道菌群多样性及组成的调节作用Chao1指数表明,PBP组的盲肠内容物菌群丰度高于AUR组;对Shannon指数分析发现,PBP组的盲肠内容物菌群多样性低于CTL组和AUR组;通过PCA主成分分析发现,CTL组、AUR组和PBP组形成三个不同的组簇,且ANOSIM相似度R>0且P<0.01,差异极显著。对仔猪盲肠内容物微生物门和属水平分析发现,PBP组的厚壁菌门/拟杆菌门比值显著高于其他组(P<0.05);PBP显著降低普氏菌属_9(Prevotella_9)、普氏菌属_1(Prevotella_1)、Syntrophococcus、Subdoligranulum和Coprococcus_3的相对丰度(P<0.05),但显著增加Ruminococcaceae UCG-013、Roseburia和Turicibacter的相对丰度(P<0.05)。对仔猪粪便微生物门和属水平分析发现,PBP组拟杆菌门的相对丰度显著降低(P<0.05);PBP组显著降低Subdoligranulum的相对丰度(P<0.05),显著增加Ruminococcaceae UCG-013的相对丰度(P<0.05)。基于Spearman相关性分析发现,共有87个菌属与抗氧化指标、炎症因子水平和紧密连接蛋白的表达显著相关(P<0.05);PBP下调的属水平上,Prevotella_1与TNF-α水平呈正相关(P<0.05),Coprococcus_3和Subdoligranulum与IL-6水平呈正相关(P<0.05),Syntrophococcus与IL-6和TNF-α水平呈正相关(P<0.05),Prevotella_1和Subdoligranulum与T-AOC水平呈负相关(P<0.05),Coprococcus_3与Claudin-1的m RNA表达呈负相关(P<0.05);PBP上调的属水平上,Turicibacter和Ruminococcaceae UCG-013与IL-1β和TNF-α水平呈负相关(P<0.05),Ruminococcaceae UCG-013与ZO-1的m RNA表达呈正相关(P<0.05),Roseburia与IL-1β和IL-6呈负相关(P<0.05),而与T-SOD活性呈正相关(P<0.05)。综上所述,松树皮多酚具有强抗氧化能力,可有效改善仔猪肠道菌群形态、多样性和结构组成,缓解肠黏膜损伤并恢复肠道屏障功能,促进仔猪健康生长,提高生猪养殖的经济效益。