背景食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。尽管采用手术、放疗和化疗的联合治疗,5年生存率仍然较低,因此,分析与肿瘤预后有关的因素,对提高食管癌病人的生存率有重要价值。大量的临床实践中发现,部分早期食管癌、结肠癌、贲门癌等在手术切除后不久就出现复发和转移;而有些局部进展期肿瘤,甚至肿瘤没被完全切除(R1或R2)的患者,术后仍能长期生存甚至治愈。大量的实例证明,确实存在着一些超越TNM分期、或分期以外的因素影响着肿瘤的治疗效果。肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphoc),tes,TILs)是存在于间质内的一类异质性细胞群体,以T细胞为主。浸润的淋巴细胞类型、密度和比例等反映了机体的抗肿瘤免疫反应状态。研究发现,TILs的数量和T细胞亚群与肿瘤的预后有明显的关系,特别是肿瘤局部的免疫平衡,与患者术后的复发和长期生存等密切相关。细胞毒性T细胞(CTL)是控制肿瘤生长的潜在效应细胞。虽然有这类细胞的存在,但肿瘤仍能生长提示免疫调节失控。具有抑制功能的CD4~+TCD25~+T调节性T细胞是CD4~+T细胞的一个亚群,表达CD25(IL-2Rα链)分子,通过细胞间接触或分泌抑制性细胞因子来抑制CD4~+TCD25~-T细胞和CD8~+T细胞的活化和增殖。Foxp3是forkhead/winged-Helix转录因子家族的一员,目前被认为是Treg最具特异性的标志,而且Foxp3的表达在调节Treg发育和功能方面发挥重要作用。高表达的Foxp3不仅与不良预后有关,而且是预测总生存和无疾病生存的独立预后因子,但不同类型的肿瘤结论不一致。研究发现在非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌和胰腺癌患者肿瘤浸润淋巴细胞以及瘤内Treg数量明显增多。在小鼠肿瘤模型研究表明去除Treg细胞可以引发抗肿瘤免疫反应。目前关于TILs在食管癌组织中的分布状况与患者的预后关系国内外少见报道。本研究采用免疫组织化学的方法检测食管癌组织中CD3~+T、CD8~+T、Foxp3~+Treg、颗粒酶B(granzymeB,GrB)阳性细胞的数量及分布情况,并分析它们与预后的关系,为食管癌预后的预测及个体化治疗提供有效的实验依据。目的检测食管癌间质和癌巢中CD3~+T、CD8~+T、Foxp3~+Treg、GrB~+T细胞的数量及分布特征,了解它们与食管癌临床病理特征的关系,并探讨与预后的关系。材料与方法1.临床病理资料:90例食管癌手术标本作为研究对象。临床、病理及随访资料完整;术前均未化疗、放疗。2.实验方法和结果判定:采用免疫组织化学技术(SP法)测定食管癌组织中CD3、CD8、Foxp3、GrB标记的淋巴细胞的数量及分布。CD3、CD8在组织中阳性定位于胞膜,Foxp3阳性定位于胞核,三者均以棕黄色、棕褐色表达为阳性;GrB阳性定位于胞浆,棕黄色阳性颗粒环绕细胞核散在分布即为活化的CD8~+T细胞。按照阳性细胞数进行结果判定。3.统计学分析:非正态数据采用中位数和范围(全距)表示;两组比较采用非参数检验方法:Mann-Whitney检验方法;不同表达组的差异采用χ~2检验、生存率差异采用Kaplan-Meier生存分析,并行Log-rank检验;预后多因素采用Cox比例风险模型,统计年龄、分期、组织学类型、分化程度等因素与生存率相关状况。α=0.05为显著性检验水准。所有数据均采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果1 CD3~+T细胞呈圆形或椭圆形,大部分聚集在癌巢周边的间质,呈灶状或淋巴滤泡样分布;少数细胞可浸入癌巢,直接与肿瘤细胞接触。在间质、癌巢中阳性细胞数分别为153.2(10.8-369.8)、22.0(0-146.6)个,差异有显著性(P＜0.01)。间质内CD3~+T细胞的数量与肿瘤的浸润深度呈负相关,P＜0.05。CD3~+T细胞高表达组3年生存率较低表达组高,差异有统计学意义(P＜0.05)。2 CD8~+T细胞呈圆形或椭圆形,大部分分布在间质中,呈灶状或淋巴滤泡样分布;少数细胞浸入癌巢,直接与肿瘤细胞接触。在间质、癌巢中阳性细胞数分别为44.4(0-172.8)、4.9(0-43.2)个,差异有显著性(P＜0.01)。间质内CD8~+T细胞的数量与肿瘤的浸润深度呈负相关,P＜0.05。高分化组其表达高于低分化组,差异有显著性(P＜0.05)。CD8~+T细胞高表达组3年生存率较低表达组高,差异有统计学意义(P＜0.05)。3 Foxp3~+Treg细胞呈圆形或椭圆形,主要聚集在间质内,呈灶状分布;少数细胞可浸入癌巢,直接与肿瘤细胞接触。在间质、癌巢中阳性细胞数分别为12.5(0-72.4)、2.9(0-19.0)个,差异有显著性(P＜0.01)。间质内Foxp3~+Treg细胞的数量与病变长度呈正相关,P＜0.05。淋巴结转移组数量高于无淋巴结转移组,差异有显著性(P＜0.05)。Foxp3~+Treg细胞与预后呈负相关,数量越多,预后越差(P＜0.05)。4 GrB~+T细胞无密集趋势,散在分布于癌巢和间质。在间质、癌巢中阳性细胞数分别为12.5(0-38.6)、2.9(0-16.4)个,差异有显著性(P＜0.01)。间质内GrB~+T的表达在淋巴结转移组数量低于无淋巴结转移组,差异有显著性(P＜0.05)。GrB~+T细胞高表达组较低表达组具有生存优势,差异无显著性(P＞0.05)。5间质内浸润的CD3~+T细胞、CD8~+T细胞、Foxp3~+Treg细胞数量、TNM分期、病变长度均是影响预后的独立因素,其中浸润的CD3~+T细胞、CD8~+T细胞增多是预后良好的指标,而是Foxp3~+Treg细胞增多提示预后不良。结论食管癌间质中CD3~+T细胞、CD8~+T细胞、Foxp3~+Treg细胞、GrB~+T细胞数量明显多于癌巢。间质中浸润的CD3~+T细胞、CD8~+T细胞、Foxp3~+Treg、GrB~+T细胞与浸润深度、淋巴结转移、病变长度、分化程度有关。肿瘤组织局部CD3~+T、CD8~+T细胞高表达组3年生存率高于低表达组,GrB~+T细胞高表达组较低表达组有生存优势,而Foxp3~+Treg细胞高表达组生存率低于低表达组。间质浸润的淋巴细胞数量可作为判断预后的指标之一,CD3~+T、CD8~+T细胞增多预后良好,Foxp3~+Treg细胞数量增多预后不良。