目的：观察本实验组制备的新型MDR逆转剂Fe3O4-MNPs共聚合DNR和Br Tet逆转耐药在体外应用的疗效和毒副作用,进行体外实验验证其逆转白血病细胞耐药的作用及机制,为体内和临床试验提供重要的理论和实验依据。　　 方法：(1)本实验组采用多聚物Pluronic F-127包油酸磁性四氧化三铁(OA—Fe3O4-MNPs)纳米颗粒包载DNR和(或)BrTet构成靶向缓释性药物,采用透射电镜、动态散射激光粒度分析仪、Zeta电位分析仪、X—Ray衍射分析仪、红外光谱法、高效液相光谱法、及体外透析实验检测合成后的磁性纳米材料的形态大小、粒径、分散稳定性、结构、载药量、包封率及其缓释效应；(2)体外实验将DNR,BrTet,DNR和BrTet,磁性纳米材料共聚合DNR,磁性纳米材料共聚合BrTet和磁性纳米材料共聚合DNR和BrTet分别作用于K562／A02细胞48h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率情况；(3)采用流式细胞术检测各组作用K562／A02细胞和K562细胞48h后细胞内柔红霉素浓度；(4)采用罗丹明123荧光染料结合流式细胞术检测P糖蛋白活性；(5)采用DAPI染色后荧光显微镜观察上述各组细胞凋亡形态；(6)采用RT—PCR法检测对照组K562细胞和K562／A02细胞及各用药组作用48h后基因survivin和MDR1的mRNA表达水平；(7)采用Western blot法检测对照组K562细胞和K562／A02细胞及各用药组细胞survivin蛋白和P—gp表达水平。　　 结果：(1)本实验组前期合成的载药磁性纳米颗粒MNPs—DNR—BrTet的粒径及其分布:其中位水合半径为135nm,PdI为0.185；Zeta电位为-27.02±0.75mV(n=3)；总载药量为8.25±1.13(％w／w)；MNPs—DNR—BrTet的体外释放:最初的5天存在突释现象,释放出约48％的DNR和37％的BrTet,此后呈良好的缓释特征,释放曲线的趋势平缓,25天可累积释放达76％的DNR和63％的BrTet。MNPs—DNR—BrTet的磁性检测:根据磁滞回线,得出其饱和磁化强度为51.31 emu／g；(2)流式细胞仪检测各用药组48h凋亡率结果示DNR和BrTet联用组及磁性纳米材料共聚合DNR和BrTet组细胞凋亡率较其他组明显升高,具有统计学意义(P<0.05),磁性材料包载单药组较单药组凋亡率稍有升高,但无统计学意义(P>0.05),其余各组与对照组间无明显差别(P>0.05)；(3)流式细胞仪检测各用药组48h后,联合用药组DNR和BrTet及磁性纳米材料共聚合DNR和BrTet该两组K562／A02细胞内柔红霉素浓度较DNR单药组及磁性纳米材料共聚合DNR组升高,差异具有统计学意义(P<0.05),磁性纳米材料共聚合DNR组的荧光较DNR组增高(P<0.05)；(4)流式细胞仪检测各用药组48h后,BrTet、DNR和BrTet、磁性纳米材料共聚合BrTet及磁性纳米材料共聚合DNR和BrTet这四组的罗丹明123的平均荧光强度较其他组明显升高,具有统计学意义(P<0.05),且BrTet组和磁性纳米材料共聚合BrTet组较DNR和BrTet组和磁性纳米材料共聚合DNR和BrTet组的罗丹明123荧光强度更高；同时K562细胞和K562／A02细胞的罗丹明123排出实验结果示K562细胞内的荧光强度明显高于K562／A02细胞,差异具有统计学意义(P<0.05)；(5)各组细胞DAPI染色后荧光显微镜观察显示DNR和BrTet联用组及磁性纳米材料共聚合DNR和BrTet组细胞凋亡形态(细胞皱缩、胞体缩小、染色质致密、边聚、固缩、碎裂、凋亡小体形成)明显,其余各组仅见少数几个凋亡形态；(6)RT—PCR法检测对照组K562细胞和K562／A02细胞及各用药组作用48h后,survivin mRNA在DNR和BrTet联用组及磁性纳米材料共聚合DNR和BrTet组表达水平明显下降(P<0.05),同时MDR1的mRNA亦在上述两组中表达水平较其他用药组明显下降(P<0.05),而对照组K562细胞的survivin和MDR1的mRNA表达水平均较其耐药细胞株K562／A02细胞明显较低(P<0.05)；(7)Western blot法检测对照组K562细胞和K562／A02细胞及各用药组作用48h后,survivin蛋白和P—gp在DNR和BrTet联用组及磁性纳米材料共聚合DNR和BrTet组的表达水平较其他组明显下降(P<0.05),而对照组K562细胞的survivin蛋白和P—gp表达水平均较其耐药细胞株K562／A02细胞明显差异,具有统计学意义(P<0.05)。　　 结论：(1)BrTet联合DNR能有效逆转耐药促进K562／A02细胞凋亡,其机制可能与降低P—gp活性和表达、提高耐药细胞内DNR浓度密切相关。　　 (2)BrTet联合DNR有效逆转耐药促进K562／A02细胞凋亡,其机制还可能与survivin基因表达下降有关。　　 (3)磁性纳米Fe3O4共聚合DNR和(或)BrTet能有效逆转耐药促进K562／A02细胞凋亡,抑制耐药细胞对化疗药物DNR的外排作用增加细胞内药物浓度,促进DNR进入胞核,因共聚合载药纳米材料具有缓释效应,相同浓度的药物作用48h凋亡效应较DNR和BrTet联用组稍差,但我们可以推测在体内实验中,磁性纳米Fe3O4共聚合药物能减少对正常组织的毒副作用,对靶组织(细胞)起到靶向缓释持续性作用,这部分实验已由本课题组其他成员完成,可见相关详细阐述。