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[目的]睾丸间质细胞(Leydig cells,LCs)主要的功能是合成和分泌睾酮,氟作为一种环境毒物,研究表明,长期氟暴露会导致睾酮分泌发生变化。本研究旨在探讨VE、IGF-I和hCG对氟暴露小鼠LCs增殖、睾酮分泌及相关调控基因表达的影响,为氟的生殖毒性机理研究和有效防治提供依据和指导。[方法]选取3-4周龄昆明雄性小鼠,体外培养小鼠LCs,采用3β-HSD染色和3β-HSD免疫荧光鉴定其纯度,姬姆萨进行形态学鉴定。之后进行体外染氟,攻毒剂量分别为0、5、20mg/L,染毒24、48小时后,MTT法检测细胞增殖,ELISA检测睾酮分泌含量,建立氟暴露模型。体外培养LCs氟暴露模型建立,添加VE、IGF-I、hCG与不同浓度氟化钠共同培养24、48小时后,MTT法检测细胞增殖,ELISA检测睾酮分泌,QRT-PCR技术检测与睾酮分泌相关基因的mRNA表达水平。[结果](1)小鼠LCs鉴定:姬姆萨染色可观察到间质细胞胞质发生铺展,伸出突起胞体呈圆形,椭圆形或不规则形。3β-HSD染色间质细胞被特异性染成蓝黑色,细胞回缩变圆。3β-HSD免疫荧光分析细胞被特异性染成绿色。证明所提取细胞为LCs,且纯度可用于下一步试验。(2)VE、IGF-I和hCG剂量筛选:通过添加不同浓度VE、IGF-I和hCG,通过MTT法和/或ELISA法检测细胞增殖和睾酮分泌,选取的VE、IGF-I和hCG的效应剂量分别为:10μg/mL、100ng/mL、100IU/mL。(3)小鼠LCs氟暴露模型建立:体外培养小鼠LCs添加浓度为0mg/L、5mg/L、20mg/L的NaF分别培养24、48小时。通过MTT法和ELISA法分别检测细胞增殖和睾酮分泌结果显示,随攻氟剂量的增加,细胞增殖和睾酮分泌呈下降趋势,20mg/L与对照组相比呈现明显的细胞毒性。(4)VE、IGF-I和hCG对体外染氟LCs细胞增殖的结果显示:24h,添加VE、IGF-I和hCG与染氟组比显著升高了细胞增殖水平且差异显著,与对照组比添加VE、hCG差异显著,IGF-I无明显变化。48h,所有处理组与染氟组比均促进了细胞增殖水平,但hCG在20mg/LNaF对细胞增殖有上升趋势但变化不显著。与对照组比,VE、IGF-I、hCG均促进了细胞增殖且变化显著。(5)VE、IGF-I和hCG对体外染氟LCs睾酮分泌结果显示:24h,添加VE、IGF-I和hCG与染氟组比除IGF-I对20mg/LNaF无明显变化其余均升高了细胞睾酮分泌含量且差异显著。与对照组比均无明显变化。48h,添加VE、IGF-I和hCG与染氟组比升高了细胞睾酮分泌含量且差异显著,与对照组比IGF-I显著升高了睾酮含量VE、hCG无明显变化。(6)应用QRT-PCR技术检测VE、IGF-I和hCG对体外染氟LCs睾酮分泌调控相关基因Star、Cyplla、17β-Hsd和3β-Hsd的mRNA表达,结果显示,添加VE与染氟组相比,Star、Cyplla和17β-Hsd的mRNA表达水平显著升高,3β-HsdmRNA的表达量无显著上升变化;添加IGF-I与染氟组相比,Star、CypllamRNA的表达水平显著升高,17β-Hsd、3β-HsdmRNA的表达量无变化;添加hCG染氟组相比,Star、Cyplla和3β-Hsd mRNA的表达水平显著升高,17β-HsdmRNA的表达水平无变化,[结论]试验结果说明,在体外染氟致小鼠睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌下降方面,添加VE、IGF-I和hCG均可以起到缓解保护作用,并且对睾丸间质细胞睾酮分泌关键基因Star、Cyplla起到上调作用。