脂肪酶催化制备中碳链结构脂和阿魏酰结构磷脂

被引量 : 10次 | 上传用户:A136C316
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
中碳链结构脂具有供能及时,改善人体对长碳链脂肪酸的吸收,满足人体对必需脂肪酸的需求,弥补长碳链甘三酯和中碳链甘三酯的缺陷等优点,其为制备肠道药品和肠胃营养品脂肪乳的重要原材料。中碳链结构脂特殊的脂肪酸定位分布,传统的化学催化剂难以胜任其制备工作,脂肪酶以其具有位置选择性、反应条件温和等优点成为制备中碳链结构脂的重要生物催化剂。但目前报道的酶法制备中碳链结构脂方法中存在脂肪酶价格高,底物侵蚀脂肪酶致其失活和批式反应中原料及能耗大等缺陷。本文主要针对以上存在的问题进行了如下研究。阿魏酸(Ferulic acid, FA)是一种天然的抗氧化剂,具有清除自由基、保护细胞、抑制血栓素释放、抗癌、抗菌消炎等功能,广泛应用于食品、医药及化妆品等领域。但由于FA在油相和水相体系中的溶解度都较低,很难渗透进入生物脂质层发挥作用,因此FA衍生物的制备成为热点问题。磷脂是细胞膜的基本组成成分,对维持细胞的通透性和细胞内氧的传递起着重要作用。若将FA分子结合到磷脂分子上,可以有效解决其生物利用度低的问题,同时可以保证FA的生理活性不受影响。由于FA和磷脂均为热敏性物质,本文利用脂肪酶催化制备阿魏酰结构磷脂(FLPs),同时对其合成路线、反应介质的选择、结构表征及反应条件的优化进行了研究。在无溶剂体系下,选择以中碳链脂肪酸(辛酸、癸酸)为酰基供体、以Lipozyme RMIM为最佳生物催化剂制备中碳链结构脂。基于目标产物的特定要求(如配方FE73403),考察了不同反应条件,包括脂肪酸摩尔比、底物摩尔比、反应温度、加酶量、酶的重复利用次数,对脂肪酸插入率的影响。在反应条件为辛酸、癸酸摩尔比4:1,底物(酸/大豆油)摩尔比6:1,温度55℃,加酶量7wt%(以总底物质量计),反应4h可达到目标配方FE73403的要求,并且酶可以重复利用12次以上。用分子蒸馏法对产品进行了分离纯化,分馏产品的甘三酯含量达90%以上,羟值为9.71,脂肪酸组成及sn-2脂肪酸组成符合目标配方FE73403要求。另外,对该反应的反应动力学及反应机制进行了研究。反应的活化能为21.1kJ/mol,酶促反应动力学参数Km和Vm分别为2.28mol/L和18.52mol/(Lxmin)。为了降低底物对固定化脂肪酶载体的侵蚀,增加脂肪酶的催化活性,建立了新的反应体系,以实验室自制中碳链脂肪酸乙酯(纯度达90%以上)为酰基供体、以价格便宜的脂肪酶Lipozyme TL IM为生物催化剂制备中碳链结构脂。基于目标配方FE73403,考察了不同反应条件,包括脂肪酸乙酯摩尔比、底物摩尔比、反应温度、加酶量,对脂肪酸插入率的影响。在反应条件为辛酸乙酯、癸酸乙酯摩尔比3:1,底物(乙酯/大豆油)摩尔比6:1,反应温度60℃,加酶量13wt%(以总底物质量计),反应可较快达到目标配方FE73403的要求。同时考察了脂肪酶的重复利用次数,当反应进行12批次(每批次12h)时,脂肪酶的活力降低明显,该酶稳定性有待进一步提高。该反应的活化能为30.1kJ/mol,酶促反应动力学参数Km和Vm分别为4.02mol/L和4.94mol/(Lxmin)。为了有效解决批式反应中原料、能耗大及生产能力低等问题,本文利用中碳链甘三酯(MCT)为酰基供体,设计并组装了固定床连续反应装置,优化了连续法制备中碳链结构脂的工艺参数,对脂肪酶的稳定性进行了考察,并用不同极性的溶剂(丙酮、异丙醇、叔丁醇和异丁醇)处理使用过的脂肪酶,对酶的循环使用进行了研究。通过批式反应中比较了两种酶的催化性能,尽管Lipozyme RM IM的sn-1,3位专一性较好,但Lipozyme TL IM具有明显的价格优势,后续研究采用价格低廉的脂肪酶Lipozyme TLIM。连续反应最佳保留时间及反应温度为30-40min和55℃,在此条件下,连续反应204h后,Lipozyme TL IM酶活损失较大,经丙酮处理后,该酶至少可循环使用四批次,可使反应的转酯化度从40%提高至55%左右。本文初步建立了以磷脂酰胆碱(PC)与阿魏酸乙酯(EF)为底物脂肪酶催化制备FLPs的反应体系以及定性定量分析产物的方法,开发了一条两步酶法制备FLPs的反应路线:第一步在脂肪酶催化下水解底物PC制得溶血磷脂酰胆碱(LPC)和甘油磷脂酰胆碱(GPC),第二步将EF加入上述反应体系中,在脂肪酶催化下制备FLPs.,对不同来源的脂肪酶及反应体系进行了筛选,最佳生物催化剂和反应介质分别为Novozym435和甲苯。利用制备型高效液相色谱制备了高纯产物—1-阿魏酰-溶血磷脂酰胆碱(1-FLP),通过TLC, HPLCLC-MS和核磁共振对产物进行了结构鉴定,确定了合成产物的分子结构为1-FLP。对利用PC和EF为底物制备FLPs的反应条件进行了单因素优化,最佳反应条件为:甲苯/三氯甲烷(90:10,v/v)5mL,PC最佳水解时间1.5h,底物摩尔比(PC:EF)5:1,最佳脂肪酶Novozym435用量60mg/mL,反应温度55℃,4A分子筛100mg/mL。在最佳反应条件下反应4天,FLPs转化率可提高至40.15+1.25%。通过响应面曲线法对反应条件进行了综合优化,最佳反应条件是:底物摩尔比5:1,PC水解时间1.5h,酶量63mg/mL,分子筛的量100mg/mL,反应温度61℃,最大理论转化率为53.21±1.78%。在最佳条件下,进行4批次试验,FLPs转化率平均值为50.18+0.92%。
其他文献
随着信息技术的发展,我国各个企业也相继将发展模式与高精的信息技术有机结合,对企业的发展产生推动性作用。在电力企业中,电力信息与电力通信技术的融合为电力系统的稳定运
食管瘘是颈椎前路手术最为致命的并发症,据报道:发生率0.04%~0.25%,病死率高达6%~45%,目前国内报道不多,现
随着我国的技术发展,我国的电网的数量以及复杂度逐渐提高,输变电设备是电网的重要部件,它直接决定了电网传输电的效率和质量同时也保证电网的安全运行。通过输变电系统对电
目的为了进一步提高骨折一临床疗效并减少肢体局部肿胀,分析和探讨在给予甘露醇脱水的同时辅以甘油果糖的价值和意义。方法选择2011年11月~2015年11月期间本院收治的105例骨折
【目的】揭示入侵我国中南三省的草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda种群间可能存在的遗传变异,探讨其入侵来源、入侵路线和扩散方式,可为制定有效控制和阻击草地贪夜蛾的方案
刑事政策是一个国家应对犯罪,惩治社会危害行为的基本原则与方法,在一个国家的刑事法律体系中占有十分重要的位置,它决定了这个国家在刑事立法和刑罚处罚上的基本尺度。自上世纪
准分子激光加工技术基于光化学机制.准分子激光具有波长短、重复频率高、单脉冲能量大、输出光斑大且能量分布均匀等特点,在精准和高效微加工领域有着独特的优势.准分子激光
玄武岩纤维在混凝土中的应用已成为国内外研究的热点,通过玄武岩纤维混凝土的抗压、抗折、抗弯冲击韧性试验,研究了玄武岩纤维掺量对混凝土力学性能的影响,得出了玄武岩纤维
离子型稀土矿床是我国独特的珍贵资源,然而它的开发利用却带来了严重的环境问题。现行的原地浸矿工艺虽然不同于已经淘汰的池浸、堆浸工艺,毋须进行“搬山”运动,较好地保护
越来越多的研究开始关注人的呼吸活动以及人体周围微环境,因为这个靠近身体的吸气及呼气区域直接关系到人体健康和疾病的传播。但是,人的呼吸活动非常复杂,受到很多因素的影响,例