论文部分内容阅读
[目的]当前,MDMA在全世界泛滥流行,是法医学和毒理学研究的热点之一。目前有关MDMA的研究主要局限于24h以上的毒性作用机制,而人们对24h以内的MDMA如何影响人体知之甚少。由于服用MDMA最短可在几分钟内起效,对人体中枢神经系统产生影响,因此对24h内神经系统MDMA的作用机制的研究非常必要。本课题利用多种方法和技术,从氧化应激、细胞凋亡和内质网Ca2+通道等方面对MDMA染毒大鼠24h内脑组织进行研究,希望能进一步阐述MDMA中毒的特点及对机体的影响,为完善MDMA法医毒理学作用机制奠定理论基础。[方法]实验1：1.建立腹腔注射MDMA(20mg/kg)成年SD大鼠染毒模型,实验组27只,对照组5只。拟将实验组按染毒后1h、12h和24h分组处死,每组9只。在处死1h组实验动物后,2-6h内有6只大鼠发生死亡,故将其分为自发死亡组,剩余12只实验动物随机分为12h处死组和24h处死组,每组6只,取脑组织备用；2.用高效液相色谱法测定不同时间段各组脑组织内5-HT和DA含量；3.用硫代巴比妥酸法和羟胺法分别测定不同组间SOD、MDA的活性；实验2：1.染毒步骤同实验1,动物及分组为实验1中的对照组、1h组、12h组和24h组。2.用HE、TUNNEL及免疫组化的方法染各组脑组织切片,并用Western Blot方法测定各组Bcl-2、Bax及Caspase-3的含量；实验3：1.染毒及分组同实验22.用RT-PCR和免疫组化的方法测定Ryr2和SERCA2的表达情况。[结果]实验1：1.染毒大鼠有明显的毒性反应,染毒后自发死亡的大鼠均在染毒6h内发生,死亡率为22.22%。2.处死组与自发死亡组大鼠脑组织5-HT均较对照组降低,1h组与12h组DA与对照组无统计学差异,24h组和死亡组比对照著升高。3.1h组、24h组SOD高于对照组,12h组与对照组无统计学差异；死亡组低于对照组。实验2：1. TUNNEL染色各实验组与对照组无显著性差异。2.各实验组大鼠脑组织Bcl-2/Bax均高于对照组。3.各实验组大鼠脑组织Caspase-3均低于对照组。实验3：1.Ryr2的RT-PCR和免疫组化的结果均是1h组与对照组无统计学差异,12h组和24h组均高于对照组,随时间的延长,呈逐渐上升的趋势。2. SERCA2的RT-PCR和免疫组化结果均是1h组、12h组和24h组高于对照组,随时间的延长,呈逐渐上升的趋势。[结论]1.MDMA染毒24h内,可诱发脑组织抗氧化物质SOD的生成及脑组织的抗凋亡效应。2. MDMA染毒24h内,可诱发内质网Ca2+通道蛋白Ryr2和SERCA2的表达。3.MDMA染毒24h内对脑组织有一定的保护作用,这种保护作用与抗氧化酶SOD、抗凋亡蛋白Bcl-2和内质网Ca2+通道蛋白的表达有关,且随着时间的延长,其保护作用有下降的趋势。4.急性MDMA中毒死亡的大鼠,单胺类神经元损伤及氧化应激反应严重,其死亡机制可能与之有关。