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Toll-like receptor3(TLR3)是TLRs受体家族中的一员,能特异地识别病毒在体内复制过程中产生的中间产物—双链RNA,并将信号向下游传递,最终激活干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor3, IRF3)和核因子κB (Nuclear factor-kappa B, NF-κB),启动核内相关基因的表达,合成Ⅰ型干扰素、白细胞介素6(Interleukin6,IL-6),IL-8、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor α, TNF-α)等细胞因子,启动和调节机体的天然免疫反应,并继而激发获得性免疫反应。人和鼠上的研究结果表明,TLR3是重要的抗病候选基因,该基因突变与多种疾病的抗性/易感性存在着显著相关。本研究在前期对猪TLR3基因进行单核苷酸突变位点(Single nucleotide polymorphisms, SNP)扫描和群体遗传学分析的基础上,选择c.800C>T (p. T266M)、c.933C>G (p.I311M)和c.2129O>G (p.T710S)3个错义突变位点,利用定点突变、真核表达、双荧光素酶报告基因系统和western blot的方法,在体外培养的猪肾上皮细胞(PK-15)内分析了上述3个SNPs突变对TLR3配体识别和信号转导的影响,在细胞水平上确定突变的功能。得到的主要结果如下：1)利用RT-PCR方法获得猪TLR3基因的完整编码区序列,全长2718bp,预期编码905个氨基酸残基的多肽链,与GenBank (DQ266435.1)上提供的序列相比,存在着3个核苷酸的差异,分别是c.36C>T、c.2643T>C和c.2649A>G,均为同义突变。2)利用重叠延伸PCR方法对猪TLR3基因编码区进行了定点突变,获得了c.800C>T、c.933C>G、c.2129C>G单碱基突变体；并成功构建了野生型和突变型的TLR3基因真核表达载体：pcDNA3.1-TLR3W、pcDNA3.1-C800T-TLR3V、pcDNA3.1-C933G-TLR3V和pcDNA3.1-C2129G-TLR3V;3)双荧光素酶报告基因分析表明,c.933A>G变异体诱导产生荧光素酶活性的能力显著下降(p<0.01),说明该突变对TLR3的配体识别和信号转导能力产生影响；4) Western-blot分析表明,c.933A>G突变对TLR3翻译水平的表达无明显影响。