猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起猪的一种高度传染性疾病。2006年我国爆发了一场主要由于猪繁殖与呼吸综合征病毒缺失变异毒株而引起的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疾病，这次大流行跨越10多个省市，给养猪业带来毁灭性的打击，导致严重的经济损失。对分离到的“高热”综合症的毒株进行了序列分析，与以前毒株相比，Nsp2基因的第483位和535—563位氨基酸发生缺失，GP5基因相互之间也是高度同源，与以前的毒株相比变异也比较大。 根据GenBank登录的美洲型PRRSV基因序列，利用美洲型PRRSV缺失变异株与经典株NSP2基因序列特点，设计合成特异性引物，建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株普通RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR鉴别诊断方法，结果表明，建立的RT-PCR鉴别诊断检测方法具有高的敏感性和强的特异性，最小检测量为11.14 pg/μL病毒cDNA；建立的鉴别检测PRRSV经典株与缺失变异株的荧光定量RT-PCR检测方法，敏感性可达1.0×101拷贝/μL，经典株和缺失变异株的标准曲线分别为CtpMD18—CH—1a=—3.16 log(DNA Concentrate)+37.67、CtpMD18—XH=—3.15 log(DNA Concentrate)+38.19，为病毒在机体内的定量检测奠定了基础。另外根据美洲型PRRSV的ORF7基因特点，设计了一套RT—LAMP检测引物，实验结果表明该方法能快速准确地鉴定美洲型PRRSV，最小检测病毒cDNA量为1.4 pg/μL，具有良好的特异性和重复性，检测敏感性高于常规RT-PCR，而且操作简便实验仪器要求较低，在实际生产中具有广阔的应用前景。 本研究建立了猪外周血单个核细胞细胞因子、细胞表面抗原、主要组织相容性复合体及凋亡进行相对定量检测方法，利用建立了SYBR GreenⅠ实时RT-PCR的方法对高致病性PRRSV病毒感染仔猪外周血单个核细胞细胞因子、细胞表面抗原、主要组织相容性复合体及凋亡进行相对定量检测，并对正常猪和感染的猪的外周血淋巴细胞中细胞因子进行相对定量结果分析。研究发现在高致病性PRRSV株感染仔猪后，IFN—r前期转录上调明显，IL—2的转录水平除第2 DPI外，其余一直处于受抑制的状态；IL—4转录水平中除2、14DPI时高于正常对照外，其余一直处于受抑制状态；IL—5 mRNA水平，除14DPI时出现一个强的转录高峰外，其余均接近正常水平；IL—6在GD—XH组1、4、7、14DPI时的转录水平高于正常对照，其余处于受抑制状态；IL-10的转录水平，前期均高于正常(尤其是7DPI)，随后被抑制。以上细胞因子检测结果暗示感染高致病性PRRSV后，机体以细胞免疫应答为主，而体液免疫应答受抑制。 感染高致病性PRRSV后，MHCⅡ转录水平的降低，体液免疫能力降低，而MHCⅠ转录水平时间推移而不断上升，但可能由于细胞被病毒破坏，仍低于正常水平。凋亡相关基因检测结果表明在感染高致病性PRRSV GD—XH组中Caspase—3随着感染时间的延长而逐渐增强，7DPI时达到高峰，随后降低，但整个实验过程中均高于正常水平。Bak基因表达上调诱发细胞凋亡，Bcl—2转录受到抑制，其转录水平接近或低于正常水平，有促进凋亡现象的发生。而在感染经典PRRSV CH—1a组中凋亡相关基因转录水平没有明显变化，均接近正常水平，说明其引起凋亡的现象不明显。 本试验用Marc—145细胞分离的高致病性PRRSV GD—XH毒株感染试验动物后，能引起感染猪较高的发病率、死亡率、体重增重缓慢和体温升高明显(最高可达41℃)。感染高致病性PRRSV后，2DPI即可检测到排毒现象，且一直持续到实验结束。组织病理学变化主要可见肺泡水肿有破裂，小支气管，细支气管可见出血、肺泡壁增厚充血、肺泡壁上皮细胞脱落，肺泡充血。脑部水肿、脑血管充血。脾脏淤血出血严重。肾小管上皮细胞崩解、出血、肾小管结构模糊、轻微淤血、肾小体血管球肿胀、个别坏死近段小管有变性坏死，下颌淋巴结血管肿胀。胰腺血管严重淤血。 血常规检测结果显示，在感染高致病性PRRSV后，GD—XH组白细胞(WBC)数短期内增高；LYM数量在于对照组和经典PRRSV CH—1a组相比明显减少，而经典PRRSV CH—1a组与对照组没有明显差别；可能是由于病毒感染前期，细胞因子等生产增多，对白细胞的生成起促进作用，而淋巴细胞减少是由于PRRSV对其的直接破坏和抑制了免疫器官的活性和功能。并且GD—XH组的单核细胞百分比也明显减少，说明由于PRRSV对免疫细胞的侵蚀而引起细胞的病理性减少。生化指标检测结果显示，推测在高致病性PRRSV感染过程中，对肝脏有慢性的实质性损害，且由于A/G比值持续下降表示预后不良。