一套水稻蛋白亚细胞定位标记系的创制

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真核生物细胞中合成的蛋白数以万计,这些蛋白需要被转运并定位到特定的空间或细胞器中才能正常行使功能。因此,确定蛋白亚细胞定位,对研究其功能具有重要的意义。荧光蛋白融合定位是研究未知功能蛋白亚细胞定位最常用的方法之一。通过与己知定位于特异细胞器的蛋白分子进行共定位荧光观察,是确定未知蛋白在特殊细胞器定位的有效策略。本研究搜索并克隆了植物保守性定位于主要细胞器,包括内质网、质体、线粒体、高尔基体、液泡、过氧化物酶体、细胞膜、细胞核、及细胞骨架等的蛋白或蛋白基序的编码序列,并分别与绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)的编码序列进行融合,构建了一系列携带特异亚细胞定位荧光蛋白融合结构的植物表达载体,利用农杆菌注射本氏烟草叶片的方法进行了初步验证。本研究进一步通过农杆菌介导法,培育了稳定表达荧光蛋白融合结构的水稻材料,通过荧光观察确定了所构建融合蛋白在水稻中的亚细胞定位。本研究所构建的亚细胞定位荧光蛋白融合结构载体及所创制的水稻蛋白亚细胞定位标记材料,将有助于水稻未知蛋白共定位及功能基因的研究。
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