miRNA19a在肝癌中调控靶基因TNF的研究

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目的:microRNAs是新发现的一种非编码小分子单链RNA家族,在恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用,它通过与靶基因的信使RNA (mRNA)的3’-UTR的互补碱基配对结合,形成沉默复合体(RISC),进而降解mRNA或使其翻译受阻。miRNA17-92基因簇是一个高度保守的基因簇,编码miRNA17、 miRNA18、miRNA19a、miRNA20、miRNA19b和miRNA92六个基因簇。目前研究证实miRNA17-92在恶性肿瘤的发生发展中发挥了重要的作用,如B细胞淋巴瘤,肺癌,恶性黑色素瘤。研究还发现miRNA19可能是miRNA17-92中的关键致癌因子。但是关于miRNA17-92基因簇参与调控肝癌的细胞生物学特性的具体作用和机制目前还不清楚。肝细胞刺激因子HPPCn (HepatopoietinCn)是我们实验室在肝脏中发现的一种新的特异的肝细胞生长因子。已经有研究证实,肝癌标本中HPPCn相对于癌旁组织存在高表达,同时还发现肝细胞的癌变与HPPCn的高表达有关,患者的存活率与HPPCn的高表达亦成负相关。有实验证实HPPCn对肝脏星型细胞的激活作用可以通过调节肿瘤坏死因子TNF而被抑制。这提示HPPCn可能与miRNA17-92的表达存在一定的相关性。我们通过(?)argetscan网站发现PTEN,TNF是miRNA19a的预测靶基因。本实验中主要研究在肝癌发生发展中miRNA17-92的各基因簇与肝细胞生长因子HPPCn的关系及miRNA19a对预测靶基因的验证。方法:首先检测肝癌标本组织中miRNA17-92基因簇与肝细胞生长因子HPPCn的表达相关性及]miRNA19a与预测靶基因PTEN,TNF的表达相关性;然后构建构包含靶基因3’-UTR的PGL-3M重组质粒,然后将重组质粒和miRNA19a模拟物共同转入HEK293细胞,利用双荧光素酶系统检测miRNA19a是否调控PTEN,TNF的表达。结果:我们发现肝癌标本中miRNA17-92与HPPCn的各基因簇表达具有一定相关性,尤其是与miRNA17, miRNA18, miRNA19a, miRNA19b的表达呈正相关。初步证实niRNA19a可以下调肿瘤坏死因子TNF的表达。结论:在肝癌组织中HPPCn与miRNA17, miRNA18, miRNA19a, miRNA19b的表达呈正相关。miRNA19a能够下调TNF的表达,这可能在肝癌的发生发展中发挥了一定的作用。
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