腹腔注射L-NAME建立先天性肥厚性幽门狭窄犬动物模型的研究神经元型一氧化氮合酶在先天性肥厚性幽门狭窄幽门的表达

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1.目的:本研究旨在通过给予Beagle孕犬腹腔注射一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME,观察新生犬生长发育及幽门环肌层厚度的情况,探索建立先天性肥厚性幽门狭窄(CHPS)犬动物模型。  方法:将4只成年受孕Beagle犬分为模型组和正常组,模型组为3只成年受孕Beagle犬,正常组为1只成年受孕Beagle犬。自分娩期前85天至分娩期前1天,模型组给予腹腔注射L-NAME,正常组给予腹腔注射等量0.9%氯化钠。模型组和正常组母犬产下的新生犬生后31天、38天、45天和52天分别称重,生后52天,选取模型组体重增长缓慢的新生犬和正常组新生犬各5只作为研究对象,外科手术取幽门组织作切片和HE染色后显微镜下测量近胃窦部幽门环肌层厚度。  结果:  (1)模型组和正常组母犬用药期间均无死亡、流产及早产等不良反应。  (2)模型组产新生犬14只,正常组产新生犬5只,所有新生犬未发现有肢体发育异常情况。  (3)与正常组相比,模型组新生犬体重增长较缓慢,两组之间差异有统计学意义。  (4)与正常组相比,模型组幽门肌层明显增生肥厚,尤其以幽门环肌层为主,肌纤维排列紊乱。两组幽门肌厚度差异具有统计学意义。  结论:给予Beagle孕犬腹腔注射L-NAME可建立类似CHPS犬动物模型。  2.目的:了解神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在幽门区的表达及其与先天性肥厚性幽门狭窄(CHPS)的关系,以进一步研究CHPS的致病机制。  方法:将4只成年受孕Beagle犬分为模型组和正常组,模型组成年受孕Beagle犬为3只,正常组成年受孕Beagle犬为1只。自分娩期前85天至分娩期前1天,模型组母犬给予腹腔注射NOS抑制剂L-NAME,建立CHPS犬模型。正常组母犬给予腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液,两组新生犬生后第31天、38天、45天及52天分别称重,生后52天,选取模型组中体重增长缓慢的新生犬和正常组新生犬各5只作为实验对象,外科手术取幽门组织作切片。HE染色后显微镜下测量近胃窦部幽门环肌厚度,免疫组化后运用图像分析技术分别测定nNOS表达的阳性面积(Area)、平均光密度(MD)和积分光密度(IOD)三项指标作定量分析,并与体重、幽门环肌厚度作相关性分析。  结果:  (1)nNOS主要表达于幽门环肌和纵肌间的肠肌神经丛细胞胞浆内,模型组中nNOS染色阳性神经纤维表达的Area和IOD及MD均较正常组减少,差异具有显著性。  (2)模型组幽门组织中nNOS表达的IOD分别与该组体重、幽门环肌厚度做相关分析,结果显示,模型组nNOS的表达与体重呈正相关,与幽门环肌厚度呈负相关。  结论:给予Beagle孕犬腹腔注射L-NAME可抑制新生犬幽门区nNOS的表达,引起新生犬幽门肌层肥厚和生长发育迟缓。
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