大肠癌变过程中microRNA、DNA甲基转移酶的相互调控及中药干预

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目的:检测大肠癌变过程中DNA甲基转移酶(DNMTs)、microRNA的表达变化,并对DNMTs和microRNA这两种表观遗传调控因子之间潜在的相互作用、以及中药左金丸的主要药理成分对DNMTs、microRNA表达的调控作用进行了初步研究。方法:本研究主要分为两个部分,第一部分的研究对象为人大肠癌的癌旁组织,采用免疫组化、Western Blot技术检测了大肠癌癌旁不同部位组织中几种细胞的分布和丰度、不同部位组织结构的特点,并在此基础上比较了DNA甲基转移酶(DNMTs)表达量和表达分布的变化;运用microRNA芯片筛选出在大肠早期癌变过程中表达异常且能够调控DNMTs的nicroRNAs,研究DNA甲基化调控与microRNA调控之间可能存在的相互关系。第二部分实验建立大鼠结肠体外培养体系,利用TGF-p诱导大鼠结肠组织,建立大肠早期癌变模型,然后加入中药左金丸的主要药理成分小檗碱、吴茱萸碱以及DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-胞苷(5-Aza-dC)进行干预,运用RT-PCR方法检测在大肠癌变过程中DNMTs、microRNA的表达变化以及左金丸的主要药理成分对二者表达的影响。成果:通过实验,初步了解了大肠癌变过程中的基础生物学变化特点,包括大肠的组织结构、细胞组成及不同类型细胞丰度的变化,以及DNMTs的表达变化,并利用microRNA芯片检测到了调控DNMTs的microRNA在大肠癌变过程中的表达变化;建立了TGF-β诱导癌变的模型,在这一模型的基础上初步探索了左金丸主要药理成分在大肠早期癌变过程中对I)NMTs和microRNA表达的影响。结论:DNMTs在大肠癌变过程当中呈现异常表达,DNMT1、DNMT3A. DNMT3B表达均有上调,调控DNMTs的microRNA表达也出现异常,在去甲基化处理后,这些microRNA的表达增加,提示这些microRNA在调控DNMTs的同时也受到DNMTs的甲基化作用而表达下调。左金丸的主要药理成分小檗碱、吴茱萸碱都能影响DNMTs. microRNA的表达水平。
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