苯并芘又称3,4-苯并芘，缩写为BaP，是世界公认的三大致癌物质之一，其在环境中存在广泛，工业生产和生活过程中煤炭、石油和天然气等燃料不完全燃烧产生的废气以及食物在熏制、烘烤和煎炸等高温烹调过程中都会产生。苯并芘的毒性具有长期和隐匿的特性，当人体接触或摄入苯并芘后即便当时没有不适反应，但也会在体内蓄积。在表现出症状前有较长的潜伏期，一般为20~25年，同时也会使子孙后代受到影响。苯并芘还具有致癌性、致畸性和致突变性，它能够引起肺癌、胃癌、膀胱癌及消化道癌等多种癌症，还能通过母体经胎盘影响子代，从而引起胚胎畸形或死亡以及幼仔免疫功能下降等。由于苯并芘来源广泛，其危害性又比较大，因此建立快速简便的苯并芘检测方法极为必要。本研究首先对苯并芘的结构进行化学改造，引入氨基后，成功合成了人工抗原（BSA-oABaP）和包被抗原（OVA-oABaP），用BSA-oABaP免疫BALB/c纯系雄性小鼠，制得了高效价的苯并芘多克隆抗体（BaP pAb），经细胞融合，建立杂交瘤细胞系制得了苯并芘单克隆抗体（BaP mAb），组装了苯并芘快速检测ELISA试剂盒，确立了最佳工作步骤，并对试剂盒性能进行了确证。主要研究内容如下：1、以BaP为原料，经硝化和还原引入氨基合成半抗原（oABaP），再采用碳化二亚胺（EDC）法将半抗原分别与牛血清白蛋白（BSA）及卵清蛋白（OVA）偶联，合成人工抗原（BSA-oABaP）和包被抗原（OVA-oABaP）；通过紫外扫描（UV)法和聚丙酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法进行鉴定；免疫BALB/c雄性小鼠，采用间接ELISA法测定小鼠多抗血清效价、阻断ELISA法测定抑制价。结果表明：紫外扫描结果显示BSA-oABaP的波峰发生右移，说明偶联成功；SDS-PAGE分析表明，BSA-oABaP泳动速度小于BSA，进一步说明偶联成功；免疫的六只小鼠血清抗体的效价均超过1:103，血清效价最高的是6号小鼠，半数抑制浓度IC50为22.14μg/L，抗体与结构相似的苯并[b]荧蒽的交叉反应率为18%，与其它化合物交叉反应率均在0.05%以下，表明获得了具有良好特异性的BaPpAb.2、用BSA-oABaP免疫BALB/c小鼠，通过间接ELISA法和阻断ELISA法，选择一只效价和抑制价均较好的小鼠作为融合备用鼠，应用细胞融合技术筛选出1D3、2A9、2E12共三株敏感特异的杂交瘤细胞，用体内诱生腹水法制备大量的苯并芘单克隆抗体（BaPmAb），经鉴定，其细胞培养上清的效价为1:3.2×102、1:5.12×102、1:6.4×102，腹水效价为1:2.56×105、1:5.0×105、1:5.12×105，腹水的IC50为1.413μg/L、1.156μg/L、0.923μg/L，亲和常数(Ka)为2.36×109L/mol、3.84×109L/mol、1.81×1010L/mol，检测亚型均为IgG1型，抗体与结构相似的苯并[b]荧蒽的交叉反应率为3.3%，与其它化合物交叉反应率均在0.05%以下，表明成功制得了具有良好特异性的BaP mAb。3、应用已制备的BaP mAb研制出苯并芘快速检测ELISA试剂盒（BaP-Kit）。BaP-Kit的标准曲线呈S型，符合检测线性要求，线性回归方程为y=-28.662x+132.87，R2=0.9902，IC50=0.779μg/L。BaP-Kit的灵敏度为0.054μg/L，在牛肉和猪肉样品中添加苯并芘标准品，平均添加回收率分别为90.05%、86.97%，平均批内和批间变异系数均小于6%，BaP-Kit与结构相似的苯并[b]荧蒽的交叉反应率为2.7%，与其它化合物交叉反应率均在0.05%以下，在4℃保存四个月后，其特异性基本无变化。