目的:胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤,因其病因及发病机理目前尚不清楚,难以开展针对病因的一级预防,因此,针对胃癌前病变的二级预防便成为胃癌防治的关键。胃粘膜的癌变往往要经历较长的癌前病变阶段,呈现慢性浅表性胃炎—慢性萎缩性胃炎—肠上皮化生—不典型增生—癌变的趋势。在慢性萎缩性胃炎基础上伴发的不典型增生和肠化生被称为癌前病变。加味左金丸是一经验方,以往的临床研究表明,其治疗慢性萎缩性胃炎癌前病变疗效肯定,但其治疗机理尚不清楚,本课题即欲从动物实验角度来进一步验证其疗效并探讨可能的作用机理。 方法:将自由饮用甲基硝基亚硝基胍(简写为MNNG),灌喂脱氧胆酸钠、热盐水、酒精及饥饱相间饮食的方法造模24周制成的胃癌前病变模型的大鼠随机分为模型组、维甲酸组、加味左金丸高、中、低剂量组,并与正常组对照。加味左金丸水煎液治疗16周,并与维甲酸组对照。观察各组大鼠的精神、食欲、被毛的光泽度和大便等情况,比较各组大鼠的体重及死亡率,观察胃粘膜病理组织学的改变(包括增生结节、肠化生、不典型增生、炎症、萎缩),采用免疫组化染色SP法检测大鼠胃粘膜上皮细胞PCNA和bcl-2蛋白的表达,采用TUNEL法原位检测细胞凋亡,并计算出细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI),经统计分析比较各组间的差异。 结果:24周成功复制出大鼠胃癌前病变模型。治疗16周后,加味左金丸各治疗组与维甲酸组大鼠体重明显增加,与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)。模型组大鼠死亡率达54.55%,其余各组大鼠未见死亡,两者差异极其显著(P<0.01)。加味左金丸中剂量组未发现明显病变,高、低剂量组与维甲酸组均未发现增生结节和肠化生,仅少数呈现轻度不典型增生,与模型组比较差异显著(P<0.05),在各治疗组间,维甲酸较中剂量组炎性浸润明显(P<0.05),与高、低剂量组比较无显著差异(P>0.05)。各治疗组均能明显下调PCNA、bcl-2蛋白的表达(与模型组比较P<0.05,与维甲酸组比较(P<0.05),中剂量组能明显升高AI(与模型组和高、低剂量组比教P<0.01)。 结论: 1、制模成功 慢性萎缩性胃炎癌前病变是一慢性过程,其发生发展与多种因素有关,如饥饱失常、咸食或腌制食物(含高盐、亚硝酸盐等)、烫热饮食、酒精刺激及胆汁返流及幽门螺旋杆菌感染等。目前,胃癌前病变模型多以MNNG为工具药,再加上上述1、2种因素制作而成。本实验以MNNG为主要工具药,结合胃癌前病变其它相关因素联合攻击的方法,不仅模拟了人的患病因素,而且缩短了实验周期,不典型增生率高,模型稳定,不失为一种较理想的制造胃癌前病变模型的方法。 2、对模型大鼠有较好的治疗作用 加味左金丸可改善模型大鼠的精神食欲,增加大鼠体重,降低死亡率,改善和治疗胃粘膜组织的炎症、萎缩和不典型增生从而减少增生结节的发生,其疗效得到了进一步的验证。 3、可能的治疗机理 细胞增殖和凋亡失衡是细胞癌变突出的特征。因此,寻找可靠的反映细胞增殖状态和凋亡的指标,通过检测细胞增殖指数和凋亡指数对探讨本方的作用机理具有重要意义。PCNA是存在于细胞核内的一种周期蛋白,是一项很好的判断细胞增殖状态的指标。Bd一2是细胞凋亡的重要调控基因,其异常表达可阻止细胞凋亡。研究表明,两者在胃癌前病变阶段呈现高表达。本实验结果显示,加味左金丸治疗组PCNA及bel一2蛋白的阳性率明显低于模型组(P<0.01),Al明显上升。因此,推断在癌前病变阶段PCNA及bel一2基因已经被激活,MNNG可能通过激活PCNA和bel一2基因导致细胞无限制的增殖、细胞凋亡的抑制导致细胞增殖与凋亡平衡失调,继而引起肿瘤的发生。而加味左金丸则可能对抗PCNA、bd一2基因的激活,诱导异型增生的细胞分化成熟,促进细胞凋亡,调控细胞的正常生长,恢复胃粘膜上皮细胞分裂、分化、衰老、死亡的动态平衡,这可能是加味左金丸治疗作用的机制之一。 4、处方合理,体现中医药的优势 慢性萎缩性胃炎属祖国医学“痞症”的范畴,病因病机复杂,或由饮食劳倦,损伤脾胃,或肝气郁结,横逆犯胃,胃气失和而上逆,胆汁反流人胃,或水湿停滞,生痰蕴热,或气机阻滞,血运不畅,胃失濡养所致。但其基本病机和病理改变即是肝脾(胃)不调(包括脾失健运,肝失条达,胃失和降),同时变生出气机的升降出入失调、气滞血疲、寒热虚实错杂等病理情况。故治疗上宜调和肝胃 (脾)、辛开苦降、行气活血、兼调寒热和辅以抗癌药物。加味左金丸全方寒热并用以和其阴阳,苦辛并进以调其升降,补泻兼施以顾其虚实,既能增强机体免疫力,又可去除病因,扶正去邪,与能促进细胞分化的西药维甲酸相比,大大减少了毒副作用,充分体现了中医药的优势。