猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus,PRRSV）引起的猪场最重要传染病之一,给全世界养猪业造成了持续的经济损害。减毒活疫苗免疫接种作为防控PRRS的有效手段在全世界范围内得到广泛应用。减毒活疫苗毒株是在猴源细胞系上连续传代获得的,导致其与亲本毒株在生物学特性上存在巨大差异,同时本实验室前期结果也提示HP-PRRSV野毒株和疫苗毒株在入胞途径上可能存在差异。本研究以HP-PRRSV野毒株HuN4株和疫苗毒株HuN4-F112株为研究对象,以病毒入胞的主要途径为切入点,对两种病毒感染Marc-145和PAM细胞时的入胞途径差异进行研究,以期为进一步揭示病毒致弱机制奠定基础。现将结果总结如下:1.PRRSV强弱毒均借助网格蛋白介导的内吞途径感染宿主细胞本实验利用网格蛋白介导的内吞途径特异性抑制剂CPZ预处理PAM和Marc-145细胞,发现CPZ处理不影响PRRSV强弱毒在PAM和Marc-145上的吸附能力,但两种病毒入胞病毒粒子数量显著低于空白对照组。利用siRNA干扰网格蛋白重链CHC的表达,结果同样显示PRRSV强弱毒入胞能力受到了明显的抑制。以上结果证实:HuN4与HuN4-F112均借助网格蛋白介导的内吞途径感染PAM和Marc-145。2.PRRSV强弱毒感染Marc-145和PAM细胞的过程中对肌动蛋白的利用存在明显差异Na^+/H⁺交换的依赖是巨胞饮的标志性特征,阿米洛利（EIPA）是Na⁺/H⁺交换的特异性抑制剂。利用EIPA预处理PAM和Marc-145细胞后接毒,发现经EIPA处理后,强弱毒在两种细胞内病毒拷贝数和蛋白表达水平与空白对照组无显著差别,阻断巨胞饮途径不影响病毒入胞。细胞骨架重排在病毒的入胞过程中发挥重要作用,细胞松弛素D（Cyt D）是肌动蛋白聚合的特异性抑制剂。用Cyt D预处理细胞后,发现病毒的吸附能力未发生明显改变,但在内化阶段、蛋白表达及子代病毒的释放上,强弱毒表现了明显的差异。在PAM细胞上,Cyt D明显抑制了细胞内HuN4病毒粒子数量,但HuN4-F112病毒粒子数量与对照组无显著差别。在Marc-145细胞上,Cyt D明显抑制了细胞内HuN4-F112病毒粒子数量,但HuN4病毒粒子入胞能力与对照组无显著差别。以上结果证实:PRRSV强弱毒均不利用巨胞饮途径感染Marc-145或者PAM细胞,但强弱毒在感染不同细胞时对肌动蛋白的依赖性存在明显的区别。3.PRRSV进入Marc-145和PAM细胞过程均需要胆固醇参与本实验通过MβCD消耗胆固醇,结果显示:胆固醇的消耗不影响HuN4与HuN4-F112在PAM和Marc-145细胞上的吸附能力,但是两种病毒入胞的病毒粒子拷贝数显著低于对照组,其蛋白表达水平也显著低于对照组。以上结果证实:PRRSV需借助脂筏入胞,消耗胆固醇能够显著抑制两种病毒的入胞能力。本研究结果初步揭示了PRRSV野毒株和疫苗毒株入胞过程的差异,为进一步揭示PRRSV疫苗毒株致弱机制提供了前期基础。