【摘 要】
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目的:探究朝医方剂鹿茸大补汤对过敏性鼻炎模型小鼠鼻粘膜炎症的影响及其作用机制。方法:实验选用雌性BALB/c小鼠50只(清洁级别),使用完全随机分配法将全部小鼠随机分为5个实验组,即空白对照组、过敏性鼻炎模型组、鹿茸大补汤低剂量组、鹿茸大补汤高剂量组,地塞米松阳性对照组。适应饲养10天后,每隔3天对除空白对照组外的4组小鼠进行腹腔注射致敏,其使用OVA与Alum混合液(0.2 mL/只,5次)。随
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目的:探究朝医方剂鹿茸大补汤对过敏性鼻炎模型小鼠鼻粘膜炎症的影响及其作用机制。方法:实验选用雌性BALB/c小鼠50只(清洁级别),使用完全随机分配法将全部小鼠随机分为5个实验组,即空白对照组、过敏性鼻炎模型组、鹿茸大补汤低剂量组、鹿茸大补汤高剂量组,地塞米松阳性对照组。适应饲养10天后,每隔3天对除空白对照组外的4组小鼠进行腹腔注射致敏,其使用OVA与Alum混合液(0.2 mL/只,5次)。随后使用20%卵清蛋白(OVA生理盐水溶液)诱导过敏性鼻炎小鼠模型,即除空白对照组外,其余各组均采用20%OVA滴鼻联合雾化的方式建立过敏性鼻炎小鼠模型,并参考小鼠行为评分表进行评分,此阶段为期21天;模型制备成功后对3组治疗组使用灌胃的方式进行为期14天的药物干预,与此同时空白对照组使用0.3%生理盐水进行灌胃,并参考小鼠行为评分表进行评分;末次药物干预后处死全部小鼠,取其眼动静脉血、鼻组织、肺组织,并使用相应的方法对标本进行处理;利用ELISA检测相应细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13及IFN-γ等)在小鼠眼球血清中浓度水平;采用HE染色处理小鼠鼻组织切片,光镜下观察评估其鼻粘膜病理学改变的程度;利用免疫组化染色方法观察小鼠鼻粘膜中NF-κBp65蛋白表达情况;使用免疫印迹检测的方式观察小鼠肺组织中NF-κBp65和p-p38MAPK蛋白的表达情况。结果:1.小鼠行为评分结果显示,较过敏性鼻炎模型组结果而言,经鹿茸大补汤高低剂量及地塞米松溶液灌胃干预后小鼠挠鼻、喷嚏等行为明显减少(P<0.05)。2.ELISA结果显示,与空白对照组相比过敏性鼻炎模型组血清中IL-4、IL-5、IL-13计数大幅度增加,IFN-γ含量则明显降低(P<0.05);较过敏性模型组结果而言,治疗组经药物干预治疗后其眼动静脉血清中IL-4、IL-5、IL-13被有效抑制计数明显降低,IFN-γ计数则明显提升(P<0.05)。3.HE染色结果显示,与空白对照组相比过敏性鼻炎模型组鼻粘膜病理改变明显,模型组小鼠完整的鼻粘膜被严重破坏,有大量上皮脱落并伴有淋巴细胞增生,鼻粘膜水肿充血严重,粘膜下层有大量嗜酸粒细胞浸润(P<0.05);较模型组结果而言,经药物干预的各组小鼠其鼻粘膜病理改变得到一定程度的改善,鼻粘膜损伤较轻粘膜较完整,炎症细胞浸润及粘膜充血情况得到改善(P〈0.05)。4.免疫组化结果显示,与空白对照组相比较,可见过敏性鼻炎模型组鼻粘膜中细胞(如:上皮细胞、腺体细胞、炎症细胞等)显现明显的棕黄色,其鼻粘膜中NF-κBp65蛋白阳性表达大幅度升高(P<0.05);较模型组免疫组化结果而言,经高低剂量的鹿茸大补汤及地塞米松溶液灌胃干预后,其鼻粘膜中NF-κBp65蛋白阳性表达得到有效的抑制,黄色颗粒颜色明显变浅(P<0.05)。5.Western blot灰度分析结果显示,参照空白对照组,过敏性鼻炎模型组小鼠肺组织中NF-KBp65和p-p38MAPK蛋白阳性表达大幅度升高(P<0.05);较模型组结果而言,经高低剂量的鹿茸大补汤及地塞米松溶液灌胃干预后,其肺组织中NF-κBp65和p-p38MAPK蛋白阳性表达得到有效的抑制(P<0.05)。结论:1.朝医方剂鹿茸大补汤可抑制过敏性鼻炎模型小鼠鼻粘膜炎症反应;2.作用机制可能与抑制NF-κBp65和p-p38MAPK蛋白阳性表达,调控Th1/Th2免疫平衡相关。
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