【摘 要】
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目的:构建载CRISPR/Cas9质粒的阳离子微泡,优化制备参数和超声辐照条件,观察阳离子微泡载体在体内体外的超声造影效果,通过低频超声爆破的转染方法,检测转染后目的蛋白C-erbb-2的表达情况,及对子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖、侵袭、迁移的作用,为研发子宫内膜癌的靶向治疗提供一种新型、高效、副作用小的可视化治疗方法提供实验依据。方法:1、通过机械震荡法制备出普通微泡(NMB),阳离子微泡(C
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目的:构建载CRISPR/Cas9质粒的阳离子微泡,优化制备参数和超声辐照条件,观察阳离子微泡载体在体内体外的超声造影效果,通过低频超声爆破的转染方法,检测转染后目的蛋白C-erbb-2的表达情况,及对子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖、侵袭、迁移的作用,为研发子宫内膜癌的靶向治疗提供一种新型、高效、副作用小的可视化治疗方法提供实验依据。方法:1、通过机械震荡法制备出普通微泡(NMB),阳离子微泡(CMB);2、构建C-erbb-2的CRISPR/Cas9质粒;3、检测NMB、CMB的基本特征、物理学性质及体内与体外造影效果;4、将CRISPR/Cas9质粒与CMB结合(CMB-CRISPR/Cas9),在低频超声辐照的作用下将C-erbb-2的CRISPR/Cas9质粒转染于子宫内膜癌HEC-1A细胞;5、转染成功后,通过Western Blot、qPCR检测目的蛋白C-erbb-2的表达情况,且通过CCK8、细胞克隆、划痕实验、Transwell与检测子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、侵袭、迁移能力情况。结果:1、镜下可见CRISPR/Cas9质粒与阳离子微泡(CMB)结合效率良好,且结合后的CMB-CRISPR/Cas9与目的细胞HEC-1A的寻靶性良好;2、NMB,CMB于体外与体内造影成像效果均满意;3、在细胞转染实验中,在转染辐照参数为30s,0.75W/cm~2条件下,成功促进了转染;4、在成功转染C-erbb-2的CRISPR/Cas9质粒后,目的蛋白C-erbb-2的表达降低,且子宫内膜癌HEC-1A细胞的增殖、迁移、侵袭能力较control组均存在明显减弱,有统计学差异。结论:CRISPR/Cas9质粒与阳离子微泡(CMB-CRISPR/Cas9)结合后具有良好的超声造影显像功能,且在低频超声爆破的作用下,能成功转染C-erbb-2的CRISPR/Cas9质粒于HEC-1A细胞,使目的蛋白C-erbb-2的表达降低,且子宫内膜癌HEC-1A细胞的增殖、迁移、侵袭能力均存在明显减弱,有统计学差异。
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