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目的:利用传统抑制肿瘤细胞增殖作用的体外实验方法和 ATP-生物荧光法,探讨眼镜王蛇毒 L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase,LAAO)对培养人肿瘤细胞增殖的抑制作用,并从细胞凋亡水平研究 LAAO 体外抗肿瘤活性的作用机制。方法:采用 JaffeA 改进方法,进行人脐静脉内皮细胞原代及传代培养并鉴定;采用 MTT 法、台盼蓝拒染法、集落形成法和 ATP-生物荧光法,以 0.02M pH7.4 Tris-HCl 为阴性对照,丝裂霉素 C(MMC)为阳性对照药,HUVEC为正常细胞对照,观察 LAAO 不同浓度不同作用时间对人类腭部小涎腺腺样囊性癌细胞系(NACC),人鼻咽癌细胞系(CNE2),人舌癌细胞系(TCA8113)及人肝癌细胞系(Bel7404)4 种人肿瘤细胞体外增殖的抑制作用;用倒置显微镜观察、H.E.染色、透射电镜、TUNEL 方法检测观察不同浓度 LAAO 对 NACC 肿瘤细胞凋亡的影响。结果:HUVEC 培养,倒置相差显微镜观察可见细胞“铺路石样”形态,免疫组化可见细胞胞浆中人第 VIII 因子相关抗原呈阳性反应,透射电镜观察,培养细胞的胞质内具有特征性的 Weibel-Palade 小体,证实培养的细胞为内皮细胞;LAAO 对 CNE2、NACC、TCA8113 、Bel7404 及 HUVEC细胞均有细胞毒性作用,并均显示出良好的量效关系,相关系数 r 值分别为0.9758、0.9793、0.9976、0.9864、0.9361(p<0.05)。处理 CNE2、NACC、TCA8113及 Bel7404 细胞 24h,LAAO 的 IC50分别是 0.26U/ml、0.54U/ml、0.23U/ml 和0.24U/ml,而 LAAO 处理正常细胞 HUVEC24 小时,其 IC50为 5.59U/ml,HUVEC与肿瘤细胞毒性比较,其IC50值分别为这四种肿瘤细胞的21.50、10.35、24.30、23.29 倍。CNE2、NACC、TCA8113、Bel7404 四种肿瘤细胞经 LAAO 处理 24、48、96 小时后,生长明显受抑制,浓度效应关系显著,相关系数 r 在 24 小时分别为 0.9986、0.9867、0.9916、0.9915 (P<0.05),其 IC50分别为 0.31U/ml、0.64U/ml、0.36U/ml、0.30U/ml;相关系数 r 在 48 小时分别为 0.9973、0.9978、0.9858、0.9916 (P<0.05),其 IC50分别为 0.21U/ml、0.32U/ml、0.26U/ml、0.20U/ml;相关系数 r 在 96 小时分别为 0.9925、0.9980、0.9950、0.9740 (P<0.05),其 IC50分别为 0.10U/ml、0.18U/ml、0.11U/ml、0.11U/ml。细胞生长抑制效应均随LAAO作用时间的延长而增强。另外LAAO还可显著抑制NACC肿瘤细胞的集落形成,并有明显的量效关系 r 值为 0.9782(p<0.01),其 IC50为 0.49U/ml;ATP-生物荧光法实验,ATP 标准曲线显示荧光强度的对数值与ATP 含量的对数值、荧光强度的对数值与肿瘤细胞数的对数值均呈良好的线性