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羧肽酶是一类从肽链的羧基端降解氨基酸残基的外肽酶,有广泛的底物特异性。与其它羧肽酶相比,羧肽酶Y不含有金属离子,对于其它羧肽酶难以降解的脯氨酸残基也表现出活性。羧肽酶Y在多肽链氨基酸测序、质谱分析、蛋白水解物的脱苦等领域有着广泛的应用。目前研究的比较充分是来源于酿酒酵母的羧肽酶Y,对于其它物种特别是来源于丝状真菌的羧肽酶Y研究较少。本实验室从雅致放射毛霉基因组中调取得到一种新型羧肽酶Y基因,成功在毕赤酵母中实现了分泌表达,但是表达量较低。本文通过选择合适的启动子、构建双质粒整合菌株、共表达分泌促进因子的方法实现了雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中高效分泌表达,并且成功在体外用蛋白酶K实现了对雅致放射毛霉羧肽酶Y酶原的激活。主要研究成果包括:（1）分别构建含有AOX1启动子和GAP启动子的雅致放射毛霉羧肽酶Y表达重组菌,通过提高抗生素浓度的筛选方法,筛选得到高效表达重组菌Zα-600-1,经甲醇诱导后胞外总蛋白的含量达到了275±20 mg·L-1。（2）在得到的高效表达重组菌Zα-600-1基础的上,构建双质粒整合菌株Zα-600-1+9K和Zα-600-1+GAP,通过提高抗生素浓度筛选重组菌,得到的高效表达重组菌分别将雅致放射毛霉羧肽酶Y的分泌表达量提高到重组菌Zα-600-1的1.51倍和1.47倍。（3）在高拷贝数的重组菌株中共表达分泌促进因子BIP（Binding protein）、PDI（Protein disulfide isomerase）、ERO1（Endoplasmic oxidoreductin 1）,将雅致放射羧肽酶Y酶原的分泌表达量分别提高到重组菌Zα-600-1的1.87倍、1.76倍、1.26倍,其中分泌效果最佳的重组菌经甲醇诱导后,胞外总蛋白的分泌量达到了525±15 mg·L-1。（4）成功在体外用蛋白酶K对雅致放射毛霉羧肽酶Y酶原进行了激活,找到了一种新的雅致放射毛霉羧肽酶Y酶原的激活方式。