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脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone,DHEA)作为机体中含量最为丰富的甾体类激素之一,其以硫酸酯的形式进入血液循环后,在外周靶组织一系列相关酶系的作用下转化为活性的类固醇激素。目前,对DHEA生物学功能的研究主要集中在其对机体脂代谢、应激反应、抗氧化能力等方面,有关DHEA对动物机体免疫功能的影响及其机制的研究报道甚少。因此,本研究通过体外实验探讨DHEA对小鼠淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的增殖活力、免疫活性因子分泌等的影响,揭示DHEA对小鼠免疫细胞生物学功能的影响;并通过灌胃不同浓度的DHEA后测定相关指标,讨论DHEA对机体不同组织抗氧化能力、血清和脾脏免疫因子含量等的影响,以期从动物整体水平上探讨DHEA对机体免疫功能的影响及其机制。研究结果将为揭示DHEA对机体免疫功能的影响及其机制提供一定的理论依据。1 DHEA对小鼠淋巴细胞分化及免疫因子分泌的影响本实验以原代分离培养的小鼠脾脏淋巴细胞为研究对象,探讨不同浓度DHEA处理对淋巴细胞分化、细胞增殖、免疫因子分泌等的影响,以期揭示DHEA对体外培养的淋巴细胞生物学功能的影响。原代分离培养的小鼠脾脏淋巴细胞分别用刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)和脂多糖(Lipopolysacchaaride,LPS)诱导细胞,得到 T 淋巴细胞和B淋巴细胞后用终浓度分别为0μmol/L、5 μmol/L、50 μmol/L和100 μmol/L的DHEA培养液孵育24 h,收集细胞。采用MTT法检测细胞相对增殖活力;流式细胞术检测T淋巴细胞分型;Real-time PCR检测免疫因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-α、TNF-β mRNA表达水平;试剂盒检测T淋巴细胞Na+K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性以及B淋巴细胞胞内Ca2+浓度。结果表明,不同浓度DHEA处理对T淋巴细胞的增殖活力没有显著影响(P>0.05),但100 μmol/L的DHEA处理可显著降低B淋巴细胞的增殖活力(P<0.05)。50μmol/L和100 μmol/L的DHEA处理可极显著促进体外培养的淋巴细胞更多的向T淋巴细胞分化(P<0.01),且可以使T淋巴细胞的分型向Th1细胞方向偏移。50 μmol/L和100 μmol/L的DHEA可极显著提高Na+K+-ATP酶的活性(P<0.01),但显著降低Ca2+-ATP酶活性(P<0.01)。不同浓度的DHEA 对 IL-10、TNF-β mRNA 水平均没有显著影响(P>0.05);5 0μmol/L 和 100μmol/L的DHEA可显著提高IL-2和IFN-α mRNA水平(P<0.01),但显著降低IL-4、IL-6 mRNA水平(P<0.01)。以上结果提示,DHEA处理可促进体外培养的淋巴细胞向T淋巴细胞分化,并向Th1细胞方向偏移,其分化的偏移可能与DHEA改变了细胞膜表面相关酶的活性的关。同时,DHEA处理可促进Th1所分泌的细胞因子的表达、抑制Th2细胞所分泌的细胞因子的表达。2 DHEA对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力和免疫因子表达的影响本实验以原代分离培养的小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,探讨不同浓度DHEA对腹腔巨噬细胞吞噬能力、NO合成、免疫因子表达等的影响,以期从揭示DHEA对腹腔巨噬细胞生物学功能的影响。分离培养小鼠腹腔巨噬细胞后,用终浓度分别为0μmol/L、5 μmol/L、50 μmol/L 和 100 μmol/L 的 DHEA 处理 24 h,收集细胞。MTT 法检测腹腔巨噬细胞增殖活力;中性红吞噬实验检测巨噬细胞的吞噬能力;试剂盒检测巨噬细胞中NO含量及NO合酶活性;Real-time PCR检测iNOS、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-β mRNA水平。结果显示,50 μmol/L的DHEA处理可极显著提高腹腔巨噬细胞的增殖活力(P<0.01)。中性红吞噬实验结果表明,5 μmol/L和50μmol/L的DHEA处理可极显著提高腹腔巨噬细胞的吞噬能力(P<0.01)。5μmol/L的DHEA处理可显著提高腹腔巨噬细胞中NO含量和NO合酶活性(P<0.05),而50 μmol/L的DHEA处理可极显著提高腹腔巨噬细胞NO含量和NO合酶活性(P<0.01)。与对照组相比,不同浓度的DHEA处理对IL-6和IL-8 mRNA水平没有显著影响,但50 μmol/L的DHEA处理可极显著提高iNOS、TNF-β和IL-10 mRNA表达水平((P<0.01)。以上结果提示,DHEA处理可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,且其可通过增强巨噬细胞中NO合酶活力而增加NO的分泌量;同时,DHEA处理可通过上调iNOS、TNF-β和IL-10 mRNA的表达水平而调节腹腔巨噬细胞的免疫学机制。3 DHEA对LPS诱导的小鼠抗氧化和免疫功能的影响本实验以LPS腹腔刺激的小鼠为模型,探讨不同浓度DHEA对免疫应激状态下的小鼠抗氧化能力和免疫功能的影响,以期从动物整体角度阐明DHEA对机体抗氧化能力和免疫功能的影响。60只ICR小鼠随机分成5组,各处理组小鼠分别灌胃0 μmol/L、5 μmol/L、50μmol/L 和 100 μmol/L 的 DHEA,每天 500 μL,连续灌胃 1 周;试验结束前,各处理小鼠腹腔注射100μL(2 mg/mL)的LPS刺激6h后,宰杀小鼠,分离血清、肝脏、肾脏等组织,待测。结果表明,不同浓度的DHEA可极显著降低小鼠血清、肝脏、脾脏和小肠组织中ROS含量,并呈现明显的剂量效应(P<0.01)。50μmol/L和100 μmol/L的DHEA处理可极显著提高血清、肝脏、脾脏和小肠组织的总抗氧化能力(P<0.01),5 μmol/L处理可显著提高小肠和脾脏的总抗氧化能力(P<0.05)。与对照组相比,不同浓度的DHEA对肝脏组织中SOD活力没有显著影响(P>0.05),但50μmol/L和100μmol/L的DHEA处理可极显著提高脾脏、血清和小肠组织中的SOD活力(P<0.01)。50μmol/L和100μmol/L的DHEA处理可显著提高小鼠血清中IL-2(P<0.05)和IFN-α的含量(P<0.01),但极显著降低血清中IL-4的含量(P<0.01)。与对照组相比,不同浓度的DHEA处理均可显著提高脾脏中IFN-α含量(P<0.05),但极显著降低脾脏中IL-10的含量(P<0.01);50 μmol/L和100μmol/L处理可极显著提高脾脏中IL-2的含量(P<0.01),但显著降低脾脏中IL-4的含量(P<0.05)。以上结果表明,DHEA处理可提高机体抗氧化能力和免疫因子的分泌而调节机体的免疫功能。