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目的研究L02/HBx细胞与L02/pcDNA3.0细胞的长链非编码RNA(lncRNA)表达谱,对差异基因进行初步生物信息学分析。方法选取实验组L02/HBx,对照组转染空质粒的L02细胞(L02/pcDNA3.0)作为实验对象,分别提取两组细胞的总RNA并纯化,检验RNA质量,反转录得到cDNA,并合成生物素标记的cRNA探针。利用lncRNA芯片技术检测两组的lncRNAs和mRNAs表达谱的差异,经过对原始数据进行预处理、均一化后,筛选出差异表达的lncRNAs和mRNAs,进行统计学分析。分别选取上调的lncRNA4个:TCONS00006195, ENST00000557524, NR037597, ENST00000539975,下调的lncRNA3个:ENST00000508424, ENST00000447433, uc0011va.4,采用SYBRGREEN I实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)在两细胞株中验证,并用GAPDH做内参。综合NCBI RefSeq, UCSC, RNAdb, lncRNAs等数据库资源,对芯片结果进行GO,pathway初步生物信息学分析。结果1.将实验组和对照组lncRNAs表达量比较:其中2倍以上变化且差异有统计学意义(P<0.05)的lncRNAs和mRNAs。与对照组比较,实验组中lncRNA上调2倍以上变化的共323条,下调2倍以上变化的共421条;mRNA上调2倍以上变化的共742条,下调2倍以上变化的共501条。2.采用SYBR绿色荧光染料(SYBRGREENI)实时检测的聚合酶链反应(RT-PCR)验证表达上调的4个lncRNAs:TCONS00006195, ENST00000557524, NR037597, ENST00000539975,表达下调的3个lncRNAs:ENST00000508424,ENST00000447433,uc0011va.4,和芯片结果基本吻合。3.GO (Gene Ontology)分析显示,在差异表达的mRNA中,上调表达的有526个参与生物学进程,下调表达的680有个参与生物学进程;上调表达的有68个参与细胞组件,下调表达的有59个参与细胞组件;上调表达的有77个参与分子功能,下调表达的有86个参与分子功能。4.Pathways分析显示,在L02/HBx细胞中有52条通路(pathway)受上调的mRNAs调控,有21条通路受下调的mRNAs调控。结论1.与对照组比较,L02/HBx细胞株lncRNAs表达谱发生了显著变化。其中RT-PCR验证TCONS00006195ENST00000557524, NR037597, ENST00000539975表达上调,ENST00000508424,ENST00000447433,uc0011va.4表达下调。2.生物信息学初步分析L02/HBx细胞株中差异表达的mRNA涉及到L02/HBx细胞的生长、分化、凋亡以及整个细胞周期过程。涉及到的通路包括:信号传导途径、凋亡途径、细胞周期途径等。