sfrp3表达下调对小鼠牙齿发育的影响

来源 :福建师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:maoht1980
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器官发育的形态发生过程中,Wnt家族信号是调节上皮和间充质之间相互作用的重要生长因子之一,在果蝇(Drosophila)和秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的遗传化学研究,非洲蟾蜍(Xenopus)的异位基因表达研究和小鼠的基因敲除实验中都证明了Wnt家族与胚胎的分节,中枢神经系统的图示形成(CNS patterning)和细胞不对称分化的调控有关。Wnt信号系统也是调节牙齿发育的四大类生长因子之一,sFRP(secreted Fizzled-related protein)是Wnt信号的调控因子,本论文通过抑制sfrp3的表达,研究Wnt信号在牙齿发育过程中所起的作用。利用RNAi技术和慢病毒转基因技术,设计针对sfrp3的siRNA,构建表达shRNA的pNL-EGFP-U6-shsfrp3-Ⅰ和pNL-EGFP-U<,6>-shsfrp3-Ⅱ质粒,使它们分别和pVSVG,pHelper组成慢病毒三质粒转染系统,再共转染293T细胞,生产EGFP-shsfrp3-I病毒和EGFP-shsfrp3-Ⅱ病毒。用EGFP-shsfrp3-Ⅰ病毒和EGFP-shsfirp3-Ⅱ病毒分别感染牙间充质细胞,通过Realtime RT-PCR方法检测各个组织的sfrp3的相对表达量,筛选出抑制效率为63%的EGFP-shspp3-Ⅱ病毒应用于研究牙齿发育。实验结果是:感染EGFP-shsJhp3-Ⅱ病毒的重组牙胚(E13.5牙间充质+E10.5牙上皮)的成牙率降低。感染EGFP—shsyhp3-Ⅱ病毒的E11.5整牙的早期发育过程会被促进。这些结果都证明了Wnt家族信号系统在牙齿早期发育中具有重要的作用。
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