目的:构建针对端粒酶逆转录酶(human telomerase reversetranscriptase，hTERT)基因的H1/U6双启动子表达框架(siRNA expression cassettes，SECs)并研究其转录生成的siRNA/miRNA对人肝癌细胞(HepG2)端粒酶活性的干扰作用，以确定siRNA/miRNA表达载体的有效性，探索制备干扰性RNA的新途径，从而为人类肿瘤的治疗提供新方法。　　方法:利用融合PCR技术，针对人端粒酶hTERT基因开放阅读区1800-1818和2650-2668位点构建2条H1/U6双启动子SECs，针对其3端非翻译区3878-3896和3964-3982位点构建2条H1/U6双启动子SECs，并构建一随机序列干扰片段为对照。利用阳离子聚合物转染试剂以及磷酸钙共沉淀法两种方法分别转染HepG2细胞，转录生成siRNA或miRNA。利用TRAP-PCR-银染法检测端粒酶活性，并对其电泳条带进行灰度扫描，计算端粒酶活性抑制率;用SYBRGreenⅠ荧光定量法直接定量端粒酶活性，分析H1/U6双启动子SECs对HepG2细胞端粒酶活性的干扰作用。　　结果:2.5％的琼脂糖凝胶电泳分析以及测序结果显示成功构建了针对端粒酶hTERT的H1/U6双启动子SECs。与对照组相比，针对不同位点的SECs的各转染组，端粒酶活性出现不同程度的抑制。采用阳离子聚合物转染法，针对位点1800-1818、2650-2668、3878-3896和3964-3982的各转染组细胞端粒酶活性抑制率分别为42.38％、61.80％、77.95％、79.51％;采用磷酸钙共沉淀法各转染组细胞端粒酶活性抑制率分别为20.19％、27.38％、42.53％、64.3％。　　结论:利用融合PCR成功构建了SECs，并且其对HepG2细胞端粒酶hTERT基因表达有明显的干扰作用。这一方法可为合成干扰RNA提供新的方法，为高通量筛选有效的干扰位点和建立RNAi文库开拓新思路，为临床开展针对肿瘤端粒酶基因干扰的实验研究奠定了基础。