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IKAROS6在急性淋巴细胞白血病中的表达和临床意义目的：本研究旨在探讨初发成人急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)患者中Ikaros6的发生率,重点研究Ikaros6与其它分子标志之间的关系以及对预后的影响。方法：收集从2006年9月到2013年6月,179例(B-ALL为105例,T-ALL为74例)初治成人ALL骨髓,分离骨髓单个核细胞并提取RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得cDNA,进行聚合酶链反应(PCR),反应产物连接载体进行测序分析,确定Ikaros6序列的正确性。用Gene scanning和实时定量PCR (Real-time PCR)动态监测初诊、部分缓解、完全缓解、复发四个时间点的BCR-ABL1和Ikaros6表达水平。此外,分析Ikaros6阳性患者临床特征,与其它分子标志之间的相关性以及对预后的影响。结果：在179例成人ALL患者中,检测到53例(29.61%)表达Ikaros6,其中105例B-ALL患者中检测到37例Ikaros6阳性(35.24%),74例T-ALL患者中检测到16例阳性(21.62%)。在B-ALL中,Ikaros6阳性患者主要分布在common B-ALL亚型(24of37,64.86%)。染色体核型分析发现阳性患者主要集中在高危核型(23of37,62.16%),尤其是Ph染色体(17of37,45.95%),并且Ikaros6与BCR-ABL1(P=0.011)、髓系相关抗原(P=0.032)的表达密切相关。利用Gene scanning和Real-timePCR动态监测患者诊治过程中BCR-ABL1和Ikaros6的表达水平,发现两者具有相同变化趋势。生存分析发现Ikaros6独立于BCR-ABL1和髓系相关抗原,提示不良预后和高复发风险。COX风险比例模型表明Ikaros6可作为一个独立的因素评估B-ALL患者的预后(OS, P=0.043, HR=1.905; EFS, P=0.044, HR=1.822; RFS, P=0.002, HR=4.992)。在T-ALL中,Ikaros6主要表达于medullary T-ALL亚型(8of16,50.00%),而与pro-T-ALL亚型存在显著的负相关性(P=0.036)。另外,在16例Ikaros6阳性患者中,有10例(62.50%)发生髓外浸润,明显高于阴性患者(34.48%),差异存在统计学意义(P=0.043)。Ikaros6对T-ALL患者的生存也有明显不良影响,总生存期(P=0.032)和无事件生存期(P=0.014)显著缩短,缓解后更容易复发(RFS,P=0.011)。结论：Ikaros6在成人急性淋巴细胞白血病中表达率较高,无论在B-ALL中,还是在T-ALL中,Ikaros6阳性患者均具有一定的临床特征。Ikaros6、BCR-ABL1、髓系相关抗原三者之间存在显著相关性,但Ikaros6独立于BCR-ABL1和髓系相关抗原,提示高复发风险。因此,Ikaros6可作为成人急性淋巴细胞白血病分层治疗和评估复发风险的理想指标。IKAROS6在急性髓系白血病中的研究目的：本研究旨在初步探讨成人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者中Ikaros6的发生率、与其它分子标志的关系以及对预后的影响。并构建人IK6基因过表达慢病毒载体,转染髓系细胞株THP1和ML-2,观察其在靶细胞中的表达并分析其对靶细胞生物学特征的影响。方法：收集从2009年1月至2013年1月,329例初治成人AML患者骨髓和外周血,分离标本中单个核细胞并提取RNA和DNA。以DNA为模板,进行聚合酶链反应,产物进行测序分析确认结果；与此同时,采用Gene scanning检测基因组改变。其次,采用RT-PCR获得cDNA,进行巢式聚合酶链反应(nest-PCR),反应产物连接载体后进行序列分析,同时采用Gene scanning确认结果。Western blot检测IK6蛋白的表达。收集整理患者的临床资料和随访结果,进行生存分析。将IK6基因与线性化慢病毒载体重组构建慢病毒载体pGC-FU-IK-GFP。在Lipofectamine2000作用下,用目的质粒转染293T细胞,测定病毒滴度后转染THP1、ML-2细胞株,流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR检测靶细胞内IK6mRNA表达,Western blot检测IK6-GFP融合蛋白,并分析其对靶细胞生物学特征的影响。结果：在329名初诊成人AML中,有32例检测到Ikaros6阳性,发生率为9.73%,主要集中在FAB分型AML-M5。Ikaros6阳性患者主要分布在1lq23非t (9；11)核型(42.86%,6/14),核型分布存在统计学差异(P=0.001)。Ikaros6与MLL融合基因之间存在显著相关性(P<0.001)。生存分析表明Ikaros6对总生存期和无事件生存期都有显著不良影响(OS,P=0.002;EFS, P<0.001),并且提示高复发风险(RFS,P<0.001)。成功构建具有Amp抗性的目的质粒pGC-FU-IK6-GFP并转染293T细胞,获得滴度为2.0×109TU/ml的病毒,然后转染THP1和ML-2细胞。转染效率可达90%,并在靶细胞中检测到IK6mRNA和IK6-GFP融合蛋白表达。IK6能够促进靶细胞克隆形成并且具有潜在抑制凋亡可能,而对细胞周期无显著影响。结论：Ikaros6在成人急性髓系白血病患者中表达率低,主要集中于AML-M5中,IKaros6与MLL融合基因之间存在显著的相关性。Ikaros6对成人AML预后有显著不良影响,因此Ikaros6可考虑作为成人AML分层治疗或预后判断的分子指标。转染构建成功的目的质粒,使靶细胞稳定表达IK6蛋白。IK6极为可能干扰了正常Ikaros的抑癌作用和潜在抗凋亡作用,在一定程度上促进白血病细胞生长。