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目的研究葛根素对顺铂诱导小鼠耳毒性的防护作用及其机制,为临床防治顺铂所致耳聋提供新思路。方法1、在体实验100只成年BALB/c小鼠随机分为四组:对照组、顺铂组、顺铂+葛根素组和葛根素组（n=25只）。顺铂组腹腔注射顺铂4.5mg/kg/d,连续5d;葛根素组腹腔注射葛根素200mg/kg/d,连续14d;顺铂+葛根素组先提前腹腔注射葛根素200mg/kg/d,连续9d,在第10d同时腹腔注射顺铂4.5mg/kg/d,连续5d;对照组则腹腔注射等量生理盐水。应用听脑干反应（auditory brainstem response,ABR）测试和耳蜗毛细胞计数,观察小鼠用药前后的听力变化和毛细胞损伤情况;应用免疫荧光染色、蛋白免疫印迹（Western blot）和实时荧光定量PCR（Real-time PCR）等技术检测耳蜗内基质交感分子1（stromal interaction molecule 1,STIM1）、Orai1、瞬时感受器电位香草酸受体1（transient receptor potential vanilloid receptor 1,TRPV1）、钙蛋白酶2（calpain2）的表达。2、离体实验取新生3d BALB/c小鼠耳蜗基底膜,于无血清的新鲜培养基中常规培养24h后,弃去原培养基。将基底膜随机分为4组,对照组给予新鲜无血清培养基2ml;顺铂组给予含有顺铂（16μg/ml）的新鲜无血清培养基2ml;顺铂+葛根素组提前给予10-6M葛根素无血清新鲜培养基培养30min后,加入顺铂（16μg/ml）至2ml;葛根素组给予10-6M葛根素无血清新鲜培养基2ml;各组在同等条件下继续培养24h。利用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）和罗丹明（tetramethylrhodamineisothiocyanate,TRITC）标记的鬼笔环肽荧光染色方法,观察耳蜗毛细胞形态变化,并统计各组毛细胞数量。应用Western blot技术检测耳蜗毛细胞内STIM1和Orai1蛋白的表达;采用Ca2+荧光探针Fluo-4 AM负载入毛细胞,激光共聚焦显微镜来观察各组耳蜗毛细胞内游离Ca2+水平。结果1.连续给药后,顺铂组ABR阈移与对照组相比明显增大（P<0.01）;顺铂+葛根素组ABR阈移与顺铂组相比明显减小（P<0.01）;葛根素组ABR阈移与对照组相比无显著性差异（P>0.05）。2.在体小鼠耳蜗和离体培养基底膜的毛细胞计数结果均显示,顺铂组外毛细胞缺失率与对照组相比显著增大（P<0.01）;与顺铂组相比,在体实验中顺铂+葛根素组耳蜗基底膜的底回和中回的外毛细胞缺失率明显减少（P<0.01）;离体实验中顺铂+葛根素组与顺铂组相比,外毛细胞和内毛细胞缺失均显著减少（P<0.01）;对照组与葛根素组相比,差异不显著（P>0.05）。3.细胞内Ca2+水平检测结果显示,顺铂组耳蜗毛细胞内的Ca2+水平明显高于对照组（P<0.01）;而顺铂+葛根素组耳蜗毛细胞内Ca2+水平与顺铂组相比显著减弱（P<0.01）;对照组与葛根素组相比荧光强度无明显差异（P>0.05）。4.Real-time PCR结果显示,顺铂组STIM1和Orai1的mRNA水平明显高于对照组（P<0.01）;而顺铂+葛根素组STIM1和Orai1的mRNA水平与顺铂组相比明显降低（P<0.05,P<0.01）;葛根素组的STIM1和Orai1的mRNA表达与对照组相比无明显变化（P>0.05）。5.免疫荧光铺片结果表明,顺铂组STIM1、Orai1的阳性反应与对照组相比显著增强（P<0.01）;顺铂+葛根素组STIM1、Orai1的阳性反应与顺铂组相比明显减弱（P<0.01）;对照组与葛根素组相比无显著性差异（P>0.05）。6.在体与离体实验的Western blot检测结果均表明,顺铂组的STIM1、Orai1表达与对照组相比均明显增强（P<0.01）;顺铂+葛根素组的蛋白表达与顺铂组相比明显减弱（P<0.05）;葛根素组与对照组相比蛋白表达并无明显变化（P>0.05）。7.免疫荧光检测结果显示,顺铂组TRPV1和calpain2蛋白阳性表达明显强于对照组（P<0.01）;顺铂+葛根素组与顺铂组相比阳性表达明显减弱（P<0.01）;而对照组与葛根素组的荧光强度相比无明显变化（P>0.05）。结论葛根素可通过减少STIM1、Orai1、TRPV1和calpain2蛋白表达,抑制耳蜗细胞发生钙超载,从而有效防护顺铂所致小鼠听功能受损。