【摘 要】
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脑卒中是目前导致人类死亡与残疾的三大主要疾病之一,严重危害了人类健康。缺血性脑卒中是由于脑血管被血栓堵塞,脑组织血液供应被阻断,导致组织损伤,大量神经元坏死,并由此
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脑卒中是目前导致人类死亡与残疾的三大主要疾病之一,严重危害了人类健康。缺血性脑卒中是由于脑血管被血栓堵塞,脑组织血液供应被阻断,导致组织损伤,大量神经元坏死,并由此引发的感觉、认知和运动等一系列大脑功能障碍。我们的前期数据表明,GluR1参与脑缺血进程并呈现动态变化。并且GluR1是大脑中广泛存在的蛋白,通过参与LTP对学习、记忆和认知起着关键作用。此外,GluR1与多种神经系统疾病如帕金森综合症,享庭顿和精神分裂症相关。因此,GluR1是多种神经和精神疾病治疗的可能药物靶点。然而脑缺血后,GluR1在突触上的动态变化并不清楚,而且目前没有很好的体内探针标记GluR1蛋白。核酸适体是人工合成的功能性单链DNA,通常通过指数富集的配体进化技术(SELEX)筛选获得。核酸适体以独特的三维结构结合从小分子到细胞的各种靶标。与传统抗体相比,核酸适体具有体积小、稳定性高、易化学修饰、低免疫性、高亲和性、高特异性等优点。因此是生物成像、临床诊断与治疗的理想工具。经过修饰的核酸适体能穿透血脑屏障,在药物递送、神经疾病诊断与治疗等神经科学领域表现出巨大的潜力。我们通过构建GluR1、GluR2重组载体,PEI瞬时转染Hela细胞,并通过Western Blot与免疫荧光鉴定GluR1与GluR2的正确表达与定位,建立了瞬时转染表达AMPAR的细胞。此外,我们还构建了GluR1、GluR2的逆转录病毒重组载体,进行病毒包装之后感染Hela细胞,再进行加药筛选,构建了表达AMPAR的稳转细胞株,并通过免疫荧光与CO-IP鉴定了GluR1与GluR2蛋白的正确表达与相互作用。然后我们在这两种不同表达AMPAR的模式下,进行了基于细胞的核酸适体筛选(Cell-SELEX),对筛选之后的文库与靶细胞孵育进行流式,监控荧光富集情况。结果显示随着筛选轮数的进行,筛选之后的文库与原始荧光文库相比,荧光均未得到增强。此外对筛选结果也进行了分析。
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